免疫试剂培训.ppt

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1、病毒性肝炎病毒性肝炎免疫检测免疫检测 免疫学免疫学 基础知识基础知识抗原抗原 指一种能刺激人或动物机体产生抗体或致指一种能刺激人或动物机体产生抗体或致敏淋巴细胞敏淋巴细胞(免疫原性或抗原性免疫原性或抗原性 )，并能，并能与这些产物在体内或体外发生特异性反应与这些产物在体内或体外发生特异性反应(反应原性反应原性 )的物质。的物质。具备免疫原性和反应原性两种能力的物质具备免疫原性和反应原性两种能力的物质称为完全抗原称为完全抗原 一种抗原只能与相应的抗体或效应一种抗原只能与相应的抗体或效应T T细胞细胞发生特异性结合发生特异性结合(特异性特异性 )抗体抗体由机体的由机体的B淋巴细胞在抗原的刺激下分化

2、淋巴细胞在抗原的刺激下分化、分裂而成的一组称为免疫球蛋白分裂而成的一组称为免疫球蛋白(Ig)的特的特殊球蛋白殊球蛋白,又称为抗体。又称为抗体。由抗原刺激机体产生的抗体，经过一定时由抗原刺激机体产生的抗体，经过一定时间后可逐渐消失间后可逐渐消失在人体至少有五种免疫球蛋白，即在人体至少有五种免疫球蛋白，即IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。免疫球蛋白分布于细胞表面、血清和其他免疫球蛋白分布于细胞表面、血清和其他体液中。体液中。抗原抗体反应抗原抗体反应（antigen-antibodyreaction）指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。合反应。抗原

3、抗体的结合实质上只发生在抗原的抗抗原抗体的结合实质上只发生在抗原的抗原决定簇与抗体的抗原结合位点之间。由原决定簇与抗体的抗原结合位点之间。由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系，与其相应的抗体结合，而不与另外两系，与其相应的抗体结合，而不与另外两种抗体反应种抗体反应,所以抗原抗体反应具有高度的所以抗原抗体反应具有高度的特异性。特异性。单克隆抗体单克隆抗体 当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多当机体受抗原刺激时，抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的决定簇分别激活各个具有不同基因的B B细胞。细胞。被激活的被激活的B B细胞分裂增殖形成该细胞的子孙

4、细胞分裂增殖形成该细胞的子孙，即克隆由许多个被激活即克隆由许多个被激活B B细胞的分裂增殖形细胞的分裂增殖形成多克隆，并合成多种抗体。成多克隆，并合成多种抗体。如果能选出一个制造一种专一抗体的细胞如果能选出一个制造一种专一抗体的细胞进行培养，就可得到由单细胞经分裂增殖进行培养，就可得到由单细胞经分裂增殖而形成细胞群，即单克隆。单克隆细胞将而形成细胞群，即单克隆。单克隆细胞将合成一种决定簇的抗体，称为单克隆抗体。合成一种决定簇的抗体，称为单克隆抗体。早期免疫学检测技术早期免疫学检测技术 通过抗原抗体反应观察沉淀物形成、通过抗原抗体反应观察沉淀物形成、凝聚及溶血现象、测定聚合体的光凝聚及溶血现象

5、测定聚合体的光散射等手段分析被测样品。散射等手段分析被测样品。检测方法有检测方法有免疫扩散免疫扩散、免疫电泳免疫电泳、直接间接血凝直接间接血凝、被动血凝被动血凝、补体结补体结合合等实验。等实验。标记的免疫技术标记的免疫技术 标记技术与抗原抗体免疫化学标记技术与抗原抗体免疫化学技术结合技术结合 检测方法有检测方法有放射性核素放射性核素标记、标记、荧光免疫荧光免疫标记、标记、酶免疫酶免疫标记、标记、稀稀土元素土元素标记以及标记以及化学发光分子化学发光分子标标记记标记的免疫测定标记的免疫测定免疫测定是一种很敏感的测定方法，免疫测定是一种很敏感的测定方法，抗原抗体反应后直接测定形成的沉淀抗原抗体反应

6、后直接测定形成的沉淀或浊度，敏感度可达或浊度，敏感度可达510g/ml，标记的免疫测定是将检测试剂中的抗标记的免疫测定是将检测试剂中的抗原或抗体用可微量测定的物质加以标原或抗体用可微量测定的物质加以标记，通过测定标记物来提高敏感度。记，通过测定标记物来提高敏感度。四大免疫标记技术四大免疫标记技术5050年代的免疫荧光（年代的免疫荧光（IFAIFA）分析技术。）分析技术。6060年代的放射免疫年代的放射免疫(RIA)(RIA)分析技术。分析技术。7070年代初用酶免疫年代初用酶免疫(EIA)(EIA)分析技术分析分析技术分析技术。技术。7070年代初胶体金免疫年代初胶体金免疫(AuIAAuIA)

7、分析技术分析技术酶免疫酶免疫标记标记疫测定疫测定（enzymeimmunoassay）由于酶的高效生物催化作用，一个酶分子在数分由于酶的高效生物催化作用，一个酶分子在数分由于酶的高效生物催化作用，一个酶分子在数分由于酶的高效生物催化作用，一个酶分子在数分钟内可以催化几十几百个底物分子发生反应，产钟内可以催化几十几百个底物分子发生反应，产钟内可以催化几十几百个底物分子发生反应，产钟内可以催化几十几百个底物分子发生反应，产生了放大作用，使得原来极其微乎其微的抗原或生了放大作用，使得原来极其微乎其微的抗原或生了放大作用，使得原来极其微乎其微的抗原或生了放大作用，使得原来极其微乎其微的抗原或抗体在数分

8、钟后就可被识别出来，抗体在数分钟后就可被识别出来，抗体在数分钟后就可被识别出来，抗体在数分钟后就可被识别出来，敏感度可比直敏感度可比直敏感度可比直敏感度可比直接测定沉淀物提高数百至数千倍。接测定沉淀物提高数百至数千倍。接测定沉淀物提高数百至数千倍。接测定沉淀物提高数百至数千倍。可分为均相（可分为均相（可分为均相（可分为均相（homogenoushomogenoushomogenoushomogenous）和非均相）和非均相）和非均相）和非均相（heterogenousheterogenousheterogenousheterogenous）两种类型，均相）两种类型，均相）两种类型，均相）两种类

9、型，均相EIAEIAEIAEIA在临床检验在临床检验在临床检验在临床检验中较少应用。中较少应用。中较少应用。中较少应用。在非均相在非均相在非均相在非均相EIAEIAEIAEIA需先进行游离的和结合的标记物的需先进行游离的和结合的标记物的需先进行游离的和结合的标记物的需先进行游离的和结合的标记物的分离。固相载体可用作一种分离手段。这种固相分离。固相载体可用作一种分离手段。这种固相分离。固相载体可用作一种分离手段。这种固相分离。固相载体可用作一种分离手段。这种固相酶免疫测定方法在酶免疫测定方法在酶免疫测定方法在酶免疫测定方法在1971197119711971年最初建立时称为酶联免年最初建立时称为酶

10、联免年最初建立时称为酶联免年最初建立时称为酶联免疫吸附剂测定简称疫吸附剂测定简称疫吸附剂测定简称疫吸附剂测定简称ELISAELISAELISAELISA，在国内有译作酶联免疫，在国内有译作酶联免疫，在国内有译作酶联免疫，在国内有译作酶联免疫吸附试验的，虽然含义不完全确切，但已习用。吸附试验的，虽然含义不完全确切，但已习用。吸附试验的，虽然含义不完全确切，但已习用。吸附试验的，虽然含义不完全确切，但已习用。酶联免疫吸附试验法酶联免疫吸附试验法（ELISAELISA）（1 1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分面，

11、可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；相互吸附，并保持其免疫学活性；（2 2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；活性；（3 3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的抗体的量成正比例的，因此

12、可以按底物显色的程度显示试验结果。程度显示试验结果。生物医学各领域的应用范围生物医学各领域的应用范围 1 1、免疫酶染色各种细胞内成份、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。的定位。2 2、研究抗酶抗体的合成。、研究抗酶抗体的合成。3 3、显现微量的免疫沉淀反应。、显现微量的免疫沉淀反应。4 4、定量检测体液中抗原或抗体、定量检测体液中抗原或抗体成份。成份。肝炎病毒 病毒性肝炎的病毒性肝炎的 病原体病原体DNA的组成的组成（Deoxyribonucleicacid）人体是由细胞构成的，细胞由细胞膜、细人体是由细胞构成的，细胞由细胞膜、细胞质和细胞核等组成胞质和细胞核等组成 在细胞核中有染色体，它主

13、要由生物的遗在细胞核中有染色体，它主要由生物的遗传物质核酸组成传物质核酸组成 核酸有两种，一种叫脱氧核糖核酸，英文核酸有两种，一种叫脱氧核糖核酸，英文缩写就是缩写就是DNADNA，另一种是核糖核酸，英文缩，另一种是核糖核酸，英文缩写是写是RNARNA。DNADNA由四种核苷酸组成，分别是腺嘌呤由四种核苷酸组成，分别是腺嘌呤(A)(A)、鸟嘌呤鸟嘌呤(G)(G)、胞嘧啶、胞嘧啶(C)(C)和胸腺嘧啶和胸腺嘧啶(T)(T)基因基因（Gene）指携带有遗传信息的指携带有遗传信息的DNADNA序列，序列，是控制性状的基本遗传单位。是控制性状的基本遗传单位。多数生物的基因由脱氧核糖核酸多数生物的基因由脱

14、氧核糖核酸（DNADNA）构成，并在染色体上作线）构成，并在染色体上作线状排列。状排列。基因通常指染色体基因。基因通常指染色体基因。肝炎病毒类型肝炎病毒类型 目前发现肝炎病毒至少有目前发现肝炎病毒至少有 种种 但已明确的有种但已明确的有种 甲型、乙型、丙型、甲型、乙型、丙型、丁型、戊型、丁型、戊型、肝炎病毒肝炎病毒 型肝炎病毒中除乙型为型肝炎病毒中除乙型为病毒外，病毒外，其余型均为病毒，其余型均为病毒，而此型之间也有较大差异。而此型之间也有较大差异。甲型肝炎甲型肝炎病毒甲型肝炎病毒（hepatitis A virus,HAV）HAVHAV属小属小RNARNA病毒病毒 HAVHAV的核酸为单一的

15、正链的核酸为单一的正链RNARNA 呈球形，无包膜呈球形，无包膜 在世界各地分离的在世界各地分离的HAVHAV 只有一个血清型。只有一个血清型。实验室检测实验室检测 机体都可产生抗机体都可产生抗-HAV的的IgM和和IgG抗体抗体应用应用RIA或或ELISA方法方法抗抗-HAVIgM出现早，消失快，是出现早，消失快，是HAV新近感染的重要指标。新近感染的重要指标。抗抗-HAVIgG在恢复后期出现，并可维持在恢复后期出现，并可维持多年。了解既往感染史或进行流行病学多年。了解既往感染史或进行流行病学调查、检测群体中抗调查、检测群体中抗-HAV阳性率，分阳性率，分析人群的免疫力，析人群的免疫力，乙型

16、肝炎乙型肝炎乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒 病毒是有感染性的完整颗粒，病毒是有感染性的完整颗粒，呈球形，具有双层衣壳。呈球形，具有双层衣壳。因因Dane(1970Dane(1970年年)首先在乙肝首先在乙肝感染的血清中发现，故又称为感染的血清中发现，故又称为DaneDane颗粒。颗粒。乙型肝炎病毒乙型肝炎病毒病毒复制病毒复制 病毒核心中的基因组病毒核心中的基因组 由乙肝病毒脱氧核糖核酸分子由乙肝病毒脱氧核糖核酸分子 （HBV-DNAHBV-DNA）及脱氧核糖核酸）及脱氧核糖核酸 聚合酶（简称聚合酶（简称DNADNA聚合酶，聚合酶，或或DNA-PDNA-P）组成。）组成。乙肝病毒乙肝病毒DNADNA和

17、和DNADNA聚合酶主宰聚合酶主宰 乙肝病毒复制，乙肝病毒复制，抗原组成抗原组成 外衣壳相当于一般病毒的包膜，由脂质双层与外衣壳相当于一般病毒的包膜，由脂质双层与外衣壳相当于一般病毒的包膜，由脂质双层与外衣壳相当于一般病毒的包膜，由脂质双层与蛋白质组成，蛋白质组成，蛋白质组成，蛋白质组成，HBVHBVHBVHBV的表面抗原即镶嵌于此脂质双层的表面抗原即镶嵌于此脂质双层的表面抗原即镶嵌于此脂质双层的表面抗原即镶嵌于此脂质双层中。中。中。中。去除病毒的外衣壳去除病毒的外衣壳去除病毒的外衣壳去除病毒的外衣壳,可暴露一电子密度较大的核可暴露一电子密度较大的核可暴露一电子密度较大的核可暴露一电子密度较大

18、的核心结构，其表面为病毒的内衣壳，是心结构，其表面为病毒的内衣壳，是心结构，其表面为病毒的内衣壳，是心结构，其表面为病毒的内衣壳，是HBVHBVHBVHBV核心抗核心抗核心抗核心抗（HBcAgHBcAgHBcAgHBcAg），），），），这种大球形颗粒的核心抗原内部含这种大球形颗粒的核心抗原内部含这种大球形颗粒的核心抗原内部含这种大球形颗粒的核心抗原内部含有病毒的有病毒的有病毒的有病毒的DNADNADNADNA和和和和DNADNADNADNA多聚酶。仅存在于感染的肝细多聚酶。仅存在于感染的肝细多聚酶。仅存在于感染的肝细多聚酶。仅存在于感染的肝细胞核内，一般不存在于血循环中。胞核内，一般不存在于

19、血循环中。胞核内，一般不存在于血循环中。胞核内，一般不存在于血循环中。在酶或去垢剂作用后，即可暴露出在酶或去垢剂作用后，即可暴露出在酶或去垢剂作用后，即可暴露出在酶或去垢剂作用后，即可暴露出e e e e抗原抗原抗原抗原（HBeAgHBeAgHBeAgHBeAg）。）。）。）。HBeAgHBeAgHBeAgHBeAg可自肝细胞分泌而大量存在于可自肝细胞分泌而大量存在于可自肝细胞分泌而大量存在于可自肝细胞分泌而大量存在于血清中血清中血清中血清中 实验室检测方法实验室检测方法RIARIA和和ELISAELISA最为敏感最为敏感而而PCRPCR中以中以PCR-ELISAPCR-ELISA和和PCRP

20、CR荧光荧光法最常用。法最常用。检测项目 1.1.HBsAgHBsAg、抗抗-HBsHBs、2.2.HBeAgHBeAg、抗抗-HbeHbe 3.3.HBcAgHBcAg、总抗总抗-HBcHBc4.HBV-DNA 抗抗-PreS1-PreS1 抗抗-PreS2PreS2 总抗总抗-HBcHBc包括包括IgM、IgG、IgA三种类型。三种类型。常规检查常规检查“两对半两对半”HBcAgHBcAg、抗抗-PreS1-PreS1、抗、抗-PreS2PreS2 不用于常规检查不用于常规检查。HBcAgHBcAg主要存在于受感染的肝细胞主要存在于受感染的肝细胞及乙肝病毒颗粒的核心内，一般血清中及乙肝病毒

21、颗粒的核心内，一般血清中较难检测到，只有用特殊的方法处理后较难检测到，只有用特殊的方法处理后才能查到，所以通常不用于常规检查。才能查到，所以通常不用于常规检查。表面抗原表面抗原(HBsAg)出现于患者血清出现于患者血清出现于患者血清出现于患者血清ALTALTALTALT升高前升高前升高前升高前2 2 2 28 8 8 8周，至恢复期周，至恢复期周，至恢复期周，至恢复期HBsAgHBsAgHBsAgHBsAg滴度逐步降低乃至消失，但有部分患者滴度逐步降低乃至消失，但有部分患者滴度逐步降低乃至消失，但有部分患者滴度逐步降低乃至消失，但有部分患者HBsAgHBsAgHBsAgHBsAg可持续存在，此

22、时即使可持续存在，此时即使可持续存在，此时即使可持续存在，此时即使HBVHBVHBVHBV已从人体内消除，已从人体内消除，已从人体内消除，已从人体内消除，肝细胞仍能不断复制肝细胞仍能不断复制肝细胞仍能不断复制肝细胞仍能不断复制HBsAgHBsAgHBsAgHBsAg。HBVHBVHBVHBV感染后，大部分人没有临床表现，称为感染后，大部分人没有临床表现，称为感染后，大部分人没有临床表现，称为感染后，大部分人没有临床表现，称为HBsAgHBsAgHBsAgHBsAg携带者，小部分人可发展为急性或慢性乙型携带者，小部分人可发展为急性或慢性乙型携带者，小部分人可发展为急性或慢性乙型携带者，小部分人可

23、发展为急性或慢性乙型肝炎，甚至肝硬化、肝癌。肝炎，甚至肝硬化、肝癌。肝炎，甚至肝硬化、肝癌。肝炎，甚至肝硬化、肝癌。绝大多数绝大多数绝大多数绝大多数HBVHBVHBVHBV感染者外周血中可出现感染者外周血中可出现感染者外周血中可出现感染者外周血中可出现HBsAgHBsAgHBsAgHBsAg，含，含，含，含量在量在量在量在5ng5ng5ng5ng600g600g600g600gmlmlmlml之间，高者可达之间，高者可达之间，高者可达之间，高者可达2000g2000g2000g2000gmlmlmlml以上。但有少部分以上。但有少部分以上。但有少部分以上。但有少部分HBVHBVHBVHBV感染

24、者血清感染者血清感染者血清感染者血清HBsAgHBsAgHBsAgHBsAg测定为测定为测定为测定为阴性阴性阴性阴性 表面抗体表面抗体（抗抗-HBs）急性乙肝病人恢复期后，随着急性乙肝病人恢复期后，随着HBsAgHBsAg的逐步的逐步消失，血清中出现抗消失，血清中出现抗HBsHBs，对，对HBVHBV的感染具的感染具有保护性免疫作用。有保护性免疫作用。10mlu10mlum1m1抗抗HBsHBs为具有免疫力的临界水平为具有免疫力的临界水平.低于此值，说明免疫失败。低于此值，说明免疫失败。接受乙肝疫苗接种者，血中一旦出现除抗接受乙肝疫苗接种者，血中一旦出现除抗HBsHBs以外的标志物，则应视为既

25、往以外的标志物，则应视为既往HBVHBV感染。感染。一般情况下，血清中抗一般情况下，血清中抗HBsHBs和和HBsAgHBsAg不同时不同时存在，存在，e e抗原抗原（HBeAgHBeAg）HBeAgHBeAg为为HBcAgHBcAg的可溶性成份，在的可溶性成份，在血清中的出现时间稍后于血清中的出现时间稍后于HBsAgHBsAg。一般一般HBeAgHBeAg阳性者，阳性者，HBsAgHBsAg亦为阳亦为阳性。性。HBeAgHBeAg阳性说明传染性强，持续阳阳性说明传染性强，持续阳性性3 3个月以上，则有慢性化倾向。个月以上，则有慢性化倾向。e e抗体抗体（抗（抗-HBeHBe）为非中和抗体，对

26、人体无保护作用，多为非中和抗体，对人体无保护作用，多在在HBeAgHBeAg转阴后数月出现。转阴后数月出现。HBeAbHBeAb阳性预示患者的传染性已显著降阳性预示患者的传染性已显著降低或相对降低，病毒复制减弱或明显缓解。低或相对降低，病毒复制减弱或明显缓解。当血清当血清HBeAgHBeAg转阴后，可出现抗转阴后，可出现抗HBeHBe，两者，两者同时阳性较少见。同时阳性较少见。抗抗HBeHBe阳性说明病毒复制减少，传染性弱，阳性说明病毒复制减少，传染性弱，但并非没有传染性。但并非没有传染性。抗抗HBeHBe不是保护性抗体，这一点与抗不是保护性抗体，这一点与抗HBsHBs不同。不同。核心抗体核心

27、抗体(HBcAb)非中和抗体，对机体无保护作用，通非中和抗体，对机体无保护作用，通常在常在HBeAgHBeAg出现后出现后3-53-5周、肝炎症状出现周、肝炎症状出现前即可在血清中检出。前即可在血清中检出。高滴度的高滴度的HBcAbHBcAb阳性常标志阳性常标志HBVHBV正在复正在复制，有传染性，可持续数年至数十年制，有传染性，可持续数年至数十年 低滴度的低滴度的HBCAbHBCAb则表示既往曾感染过则表示既往曾感染过HBVHBV。总抗总抗-HBc（HBcAb）包括包括抗抗 HBcHBc 的 IgMIgM、IgGIgG 、IgAIgA、和、和IgEIgE抗抗-HBc-IgMHBc-IgM 抗

28、抗-HBc-IgMHBc-IgM是是HBVHBV感染的早期抗体。急性乙感染的早期抗体。急性乙肝患者于肝患者于HBVHBV感染后血清转氨酶（感染后血清转氨酶（ALTALT）异）异常达高峰时，即可检出抗常达高峰时，即可检出抗-HBc-IgMHBc-IgM，阳性，阳性率几为率几为100%100%，且滴度较高，一般持续，且滴度较高，一般持续3 36 6个月，逐渐下降至转阴。个月，逐渐下降至转阴。抗抗-HBc-IgMHBc-IgM既是既是HBVHBV近期感染的指标，也近期感染的指标，也是肝内是肝内HBVHBV持续活跃复制的指标，并提示病持续活跃复制的指标，并提示病人血液有传染性。抗人血液有传染性。抗-H

29、Bc-IgMHBc-IgM由阳性转为由阳性转为阴性，预示急性乙肝康复。阴性，预示急性乙肝康复。抗抗-HBc-IgG 抗抗-HBc-IgGHBc-IgG主要用于流行病学调主要用于流行病学调查，只有抗查，只有抗-HBc-IgGHBc-IgG阳性，不能区阳性，不能区分是近期感染还是既往感染，但一分是近期感染还是既往感染，但一般认为高滴度的抗般认为高滴度的抗-HBc-IgGHBc-IgG也提示也提示病毒可能尚在复制。病毒可能尚在复制。抗抗-HBc-IgAHBc-IgA 抗抗-HBc-IgAHBc-IgA型抗体阳性一定程度型抗体阳性一定程度上可以反映上可以反映HBVHBV的复制情况的复制情况 抗抗-HB

30、c-IgAHBc-IgA可能是可能是HBVHBV慢性感染慢性感染的更特异的指标，并提示与肝损伤的更特异的指标，并提示与肝损伤程度密切相关。在慢活肝时，血清程度密切相关。在慢活肝时，血清中抗中抗-HBc-IgAHBc-IgA检出率比慢性迁延型检出率比慢性迁延型肝炎显著增高。肝炎显著增高。小三阳小三阳 表面抗原（表面抗原（HBsAgHBsAg）、）、e e抗体（抗体（HBeAbHBeAb）和抗核杭体（和抗核杭体（HBcAbHBcAb）为阳性）为阳性 “HBsAgHBsAg(+)(+)、抗、抗-HbeHbe(+)(+)、抗、抗-HBcHBc(+)”(+)”主要反映体内病毒活性低，传染性较主要反映体内

31、病毒活性低，传染性较弱，如果没有肝功能异常，可以不治疗。弱，如果没有肝功能异常，可以不治疗。大三阳大三阳 表面抗原（表面抗原（HBsAgHBsAg）、）、e e抗（抗（HBeAgHBeAg）和抗核杭体（和抗核杭体（HBcAbHBcAb）为阳性。）为阳性。“HBsAgHBsAg(+)(+)、HBeAgHBeAg(+)(+)、抗、抗-HBcHBc(+)”(+)”主要反映体内病毒活性高，传染性最主要反映体内病毒活性高，传染性最强，患者宜适当隔离并接受抗病毒治强，患者宜适当隔离并接受抗病毒治疗。疗。乙肝病毒乙肝病毒DNADNA 检查检查检验病毒检验病毒DNA PCRPCR法法法法 (polymeras

32、e chain reaction(polymerase chain reaction 或或或或RT-RT-PCRPCR等等等等)，很敏感，但误差大，价钱比较贵，通常，很敏感，但误差大，价钱比较贵，通常，很敏感，但误差大，价钱比较贵，通常，很敏感，但误差大，价钱比较贵，通常单位用单位用单位用单位用 copies/ml of plasmacopies/ml of plasma。bDNAbDNA法法法法(branched chain DNA assay)(branched chain DNA assay)，也是，也是，也是，也是目前常用的方法，敏感，常规化，结果比较稳定，目前常用的方法，敏感，常规化

33、结果比较稳定，目前常用的方法，敏感，常规化，结果比较稳定，目前常用的方法，敏感，常规化，结果比较稳定，价钱比较便宜，通常单位用价钱比较便宜，通常单位用价钱比较便宜，通常单位用价钱比较便宜，通常单位用 units/ml of units/ml of plasma(pg/mlplasma(pg/ml，fgfg/ml)/ml)。目前测验目前测验目前测验目前测验HBV-DNAHBV-DNA时通常要达到两个目的。时通常要达到两个目的。时通常要达到两个目的。时通常要达到两个目的。一个是定性一个是定性一个是定性一个是定性(qualitative)(qualitative)，另外一个是定量，另外一个是定量，

34、另外一个是定量，另外一个是定量(quantitative)(quantitative)。HBV-DNAHBV-DNA定性定性 测验注重于测验注重于HBV-DNAHBV-DNA的存在，的存在，它通常可以测到低于它通常可以测到低于100copies/ml100copies/ml的病毒存在。的病毒存在。定性通常只给阴性、阳性定性通常只给阴性、阳性的结果。的结果。HBV-DNAHBV-DNA定量 测定着重于测定着重于HBV-DNAHBV-DNA量存在的多少。量存在的多少。通常用于定量的极限在通常用于定量的极限在0.1-5 pg/ml(1 0.1-5 pg/ml(1 pg/ml=283pg/ml=283

35、000 copies/ml)000 copies/ml)之间。之间。更精确的仪器可以测到更精确的仪器可以测到0.001-0.005 pg/ml0.001-0.005 pg/ml的精度。的精度。国外常用国外常用 fgfg/ml/ml 为单位。为单位。copies/ml copies/ml 比比 fgfg/ml/ml，pg/ml pg/ml 单位更小。单位更小。fgfg/ml/ml，pg/ml pg/ml 显示定量比。显示定量比。丙型肝炎丙型肝炎 丙型肝炎病毒丙型肝炎病毒 检查抗体用酶联免疫法检检查抗体用酶联免疫法检测抗体，可快速过筛献血员并测抗体，可快速过筛献血员并可用于诊断丙肝患者。可用于诊

36、断丙肝患者。抗抗-HCV-HCV阳性者表示已被阳性者表示已被HCVHCV感染，不可献血。感染，不可献血。查病毒查病毒RNARNA 因因HCVHCV在血液中含量很少，故需用极敏在血液中含量很少，故需用极敏感的检测方法。感的检测方法。采用套式采用套式RT-PCRRT-PCR法，即从病人血清中提法，即从病人血清中提取病毒取病毒RNARNA，经逆转录酶作用合成，经逆转录酶作用合成cDNAcDNA，再用再用2 2对引物先后扩增，以求扩增出极微对引物先后扩增，以求扩增出极微量的病毒量的病毒RNARNA。目前常采用目前常采用PCR-PCR-荧光法检测荧光法检测HCV-RNAHCV-RNA，此法不但可以定性，

37、亦可定量检测。此法不但可以定性，亦可定量检测。丁型肝炎丁型肝炎实验室检测法实验室检测法 HDVHDV感染后感染后2 2周产生抗周产生抗-HDIgMHDIgM，一个月达，一个月达到高峰，随之迅速下降。到高峰，随之迅速下降。抗抗-HDIgGHDIgG产生较迟，在恢复期出现。产生较迟，在恢复期出现。丁肝抗体不能清除病毒，如持续高效价，丁肝抗体不能清除病毒，如持续高效价，可作为慢性丁肝的指标。可作为慢性丁肝的指标。一般可用免疫荧光法、一般可用免疫荧光法、RIARIA或或ELISAELISA检测检测肝组织或血清中的肝组织或血清中的HDAgHDAg，但患者标本应先，但患者标本应先经去垢剂处理，以除去表面的

38、经去垢剂处理，以除去表面的HBsAgHBsAg，暴露，暴露出出HDAgHDAg。也可用血清斑点杂交法或。也可用血清斑点杂交法或PCRPCR检测检测HDVHDV基因组进行诊断。基因组进行诊断。戊型肝炎戊型肝炎实验室检测实验室检测 对对HEVHEV的感染最好作病原学诊断，否则很难与甲的感染最好作病原学诊断，否则很难与甲型肝炎相区别。型肝炎相区别。可用电镜或免疫电镜技术检测患者粪便中的可用电镜或免疫电镜技术检测患者粪便中的HEVHEV病毒颗粒，也可用病毒颗粒，也可用RT-PCRRT-PCR法检测粪便或胆汁中的法检测粪便或胆汁中的HEVRNAHEVRNA。目前临床诊断常用的方法是检查血清中的目前临床诊

39、断常用的方法是检查血清中的抗抗-HEVIgMHEVIgM或或IgGIgG，如抗，如抗-HEVIgMHEVIgM阳性，则可确诊患阳性，则可确诊患者受者受HEVHEV感染；如血清中存在抗感染；如血清中存在抗-HEVIgGHEVIgG，则不能，则不能排除是既往感染；因为抗排除是既往感染；因为抗-HEVIgGHEVIgG在血中持续存在在血中持续存在的时间可达数月至数年。的时间可达数月至数年。乙肝病毒乙肝病毒 前前S1S1抗原抗原 前前S1S1蛋白蛋白 乙型肝炎病毒（乙型肝炎病毒（HBVHBV）外膜蛋白包括）外膜蛋白包括S S、前、前S2S2和前和前S1S1三种成分。三种成分。前前S1S1蛋白在病毒侵入

40、肝细胞过程中起重要作蛋白在病毒侵入肝细胞过程中起重要作用。用。含有前含有前S1S1的蛋白主要存在于的蛋白主要存在于DaneDane颗粒和管型颗粒和管型颗粒上。前颗粒上。前S1S1蛋白在病毒感染、装配、复制和刺蛋白在病毒感染、装配、复制和刺激机体产生免疫反应等方面起有十分重要作用。激机体产生免疫反应等方面起有十分重要作用。机体内含有机体内含有HBVHBV就有前就有前S1S1抗原。抗原。前、前抗原抗体系统前、前抗原抗体系统 前抗原，前抗体；前抗原，前抗体；前抗原，前抗体。前抗原，前抗体。大多学者认为前、前抗原大多学者认为前、前抗原的阳性，表明体内乙肝病毒的繁殖，的阳性，表明体内乙肝病毒的繁殖，前、

41、前抗体阳性表明疾病前、前抗体阳性表明疾病的恢复及对再次感染起保护作用。的恢复及对再次感染起保护作用。1 1、由于前、由于前S1S1抗原出现在急性乙型肝炎感染的最早抗原出现在急性乙型肝炎感染的最早期，在转氨酶升高前即可查出，所以它可作为早期诊断期，在转氨酶升高前即可查出，所以它可作为早期诊断乙肝病毒感染的指标。乙肝病毒感染的指标。2 2、急性乙肝患者前、急性乙肝患者前S1S1抗原阴转越早，预后越好，抗原阴转越早，预后越好，是病毒清除的最早迹象。反之，前是病毒清除的最早迹象。反之，前S1S1抗原持续阳性，预抗原持续阳性，预示着感染将发展成慢性肝炎。示着感染将发展成慢性肝炎。3 3、抗、抗HBeHB

42、e（）慢性乙肝约占慢肝的（）慢性乙肝约占慢肝的303050%50%，检，检测前测前S1S1抗原阳性，提示病毒在机体内继续复制，此类患抗原阳性，提示病毒在机体内继续复制，此类患者更容易演变为肝硬化或肝癌。加查前者更容易演变为肝硬化或肝癌。加查前S1S1抗原弥补了抗原弥补了HBeAgHBeAg的缺失造成的诊断和治疗困难。的缺失造成的诊断和治疗困难。4 4、抗病毒治疗乙肝，加查前、抗病毒治疗乙肝，加查前S1S1抗原可作为治疗前抗原可作为治疗前的患者筛查（适应症）和治疗后的疗效判断，尤其对抗的患者筛查（适应症）和治疗后的疗效判断，尤其对抗HBeHBe（）的慢性乙肝患者抗病毒药物治疗的排查可起（）的慢性

43、乙肝患者抗病毒药物治疗的排查可起到重要作用。（国外已有文献报道，前到重要作用。（国外已有文献报道，前C C区变异者不适区变异者不适宜用干扰素。）宜用干扰素。）Pre-S1 Pre-S1检测价值检测价值 在不具备在不具备DNADNA检测设备或环境的情形下，检测设备或环境的情形下，使用简单准确、价格低廉的使用简单准确、价格低廉的Pre-S1Pre-S1检检测并联合测并联合HBVHBV五项的检测，对五项的检测，对HBVHBV感染感染的早期诊断、及时治疗、监测愈后及的早期诊断、及时治疗、监测愈后及院内感染的控制等方面具有重要的意院内感染的控制等方面具有重要的意义。同时，对于筛选献血员，确保病义。同时，

44、对于筛选献血员，确保病人用血安全方面具有更大价值。人用血安全方面具有更大价值。S1S1抗原酶免测定试剂盒应用抗原酶免测定试剂盒应用 乙型肝炎病毒前乙型肝炎病毒前S1S1抗原检测是由中科抗原检测是由中科院上海生物化学研究所完成的科研成院上海生物化学研究所完成的科研成果，是国家果，是国家863863科研项目，科研项目，20002000年通过年通过了国家认证，同年了国家认证，同年1212月经国家药监局月经国家药监局批准投入临床使用。目前全国绝大多批准投入临床使用。目前全国绝大多数地区的三级医院都已开展了数地区的三级医院都已开展了S1S1抗原抗原检测。检测。S1S1抗原酶免测定试剂盒应用抗原酶免测定试

45、剂盒应用 乙肝病毒前乙肝病毒前S1S1抗原酶免测定试剂盒的正式推抗原酶免测定试剂盒的正式推向临床以及近两年在北京、四川、浙江、向临床以及近两年在北京、四川、浙江、河南、深圳、海南等近百家医院与乙肝河南、深圳、海南等近百家医院与乙肝“两对半两对半”检测的联合应用，充分显示了该检测的联合应用，充分显示了该试剂在病毒性乙型肝炎的临床诊断，指导试剂在病毒性乙型肝炎的临床诊断，指导治疗等方面的重要价值。前治疗等方面的重要价值。前S1S1抗原（抗原（Pre-Pre-S1AgS1Ag）检测是对乙肝）检测是对乙肝“两对半两对半”尤其是尤其是e e抗抗原和原和HBV-DNAHBV-DNA测定的重要补充和加强。测

46、定的重要补充和加强。乙型肝炎病毒（乙型肝炎病毒（HBV）二对半五联胶体金快速检测试纸二对半五联胶体金快速检测试纸 一次加样同时检测乙肝两对半五项指标，一次加样同时检测乙肝两对半五项指标，方便快捷。方便快捷。金标诊断试剂盒金标诊断试剂盒甲型肝炎病毒甲型肝炎病毒甲型肝炎病毒甲型肝炎病毒IgMIgMIgMIgM抗体金标诊断试剂盒抗体金标诊断试剂盒抗体金标诊断试剂盒抗体金标诊断试剂盒甲型肝炎病毒甲型肝炎病毒甲型肝炎病毒甲型肝炎病毒IgGIgGIgGIgG抗体金标诊断试剂盒抗体金标诊断试剂盒抗体金标诊断试剂盒抗体金标诊断试剂盒乙肝五项金标诊断试剂盒（五孔加样）乙肝五项金标诊断试剂盒（五孔加样）乙肝五项金

47、标诊断试剂盒（五孔加样）乙肝五项金标诊断试剂盒（五孔加样）乙肝表面抗原金标诊断试剂盒乙肝表面抗原金标诊断试剂盒乙肝表面抗原金标诊断试剂盒乙肝表面抗原金标诊断试剂盒乙肝表面抗原金标诊断试剂盒乙肝表面抗原金标诊断试剂盒乙肝表面抗原金标诊断试剂盒乙肝表面抗原金标诊断试剂盒(全血全血全血全血)乙肝表面抗体金标诊断试剂盒乙肝表面抗体金标诊断试剂盒乙肝表面抗体金标诊断试剂盒乙肝表面抗体金标诊断试剂盒乙肝表面抗体金标诊断试剂盒乙肝表面抗体金标诊断试剂盒乙肝表面抗体金标诊断试剂盒乙肝表面抗体金标诊断试剂盒(全血全血全血全血)乙肝乙肝乙肝乙肝E E E E抗原金标诊断试剂盒抗原金标诊断试剂盒抗原金标诊断试剂盒抗原金标诊断试剂盒乙肝核心抗体金标诊断试剂盒乙肝核心抗体金标诊断试剂盒乙肝核心抗体金标诊断试剂盒乙肝核心抗体金标诊断试剂盒丙型肝炎抗体金标诊断试剂盒丙型肝炎抗体金标诊断试剂盒丙型肝炎抗体金标诊断试剂盒丙型肝炎抗体金标诊断试剂盒丙型肝炎抗体金标诊断试剂盒丙型肝炎抗体金标诊断试剂盒丙型肝炎抗体金标诊断试剂盒丙型肝炎抗体金标诊断试剂盒丙型肝炎抗体金标诊断试剂盒丙型肝炎抗体金标诊断试剂盒丙型肝炎抗体金标诊断试剂盒丙型肝炎抗体金标诊断试剂盒(全血全血全血全血)戊型肝炎抗体金标诊断试剂盒戊型肝炎抗体金标诊断试剂盒戊型肝炎抗体金标诊断试剂盒戊型肝炎抗体金标诊断试剂盒 谢谢！谢谢！