耐甲氧西林金黄色葡萄球菌MRSA检测荧光PCR法.ppt

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1、上海之江生物科技股份有限公司Shanghai ZJ Bio-Tech Co.,Ltd.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)检测（荧光光PCR法）法）金葡/表葡/腐生致病性强耐甲氧西林金葡葡萄球菌金黄色葡萄球菌MRSAl1.MRSA背景资料背景资料What Is MRSA?金黄色葡萄球菌致病性1、金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原、金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌菌 2 2、可引起、可引起局部化脓感染局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至严重到败血症、脓毒症等炎、心包炎等，甚至严重到败血症、脓毒症等全身感全身感染

2、染。3、其致病的强弱取决于其产生毒素和侵袭性酶其致病的强弱取决于其产生毒素和侵袭性酶 溶血毒素 杀白细胞素 血浆凝固酶 肠毒素金葡菌的院内感染u手术切口感染手术切口感染u各种插管感染各种插管感染u下呼吸道感染下呼吸道感染u尿路感染尿路感染u胃肠感染胃肠感染u皮肤和软组织感皮肤和软组织感染染u血液感染血液感染u病人往往抵抗力低下病人往往抵抗力低下u正常医疗操作可能导致病人的正常医疗操作可能导致病人的正常免疫屏障受损正常免疫屏障受损u接受化疗、激素治疗等治疗容接受化疗、激素治疗等治疗容易出现免疫力迅速降低易出现免疫力迅速降低u不合理大量抗生素治疗容易导不合理大量抗生素治疗容易导致菌群失调致菌群失调

3、u医院是病原体相对集中的环境医院是病原体相对集中的环境u菌群交叉感染等菌群交叉感染等SA VS MRSA 耐药的产生机制一种特殊蛋白的产生一种特殊蛋白的产生低亲和力的青霉素结合蛋白低亲和力的青霉素结合蛋白PBP2mecA基因基因 PBP2 耐药性耐药性金葡的耐药性STAPHYLOCOCCICoagulase Negative Staphylococci S.aureusMSSA MRSA 对于MRSA万古霉素常是治疗的唯一药物，而万古霉素具有很强的副作用，易导致病人出现肝肾问题。同时，万古霉素的使用会诱发耐万古霉素金葡（VRSA）的产生，致使尤其引起的各种感染发展到无药可用的地步。因而在未确定

4、是耐药性金葡感染前需特别注意慎重用药。l近年在南欧部分国家和英国MRSA在金葡菌感染中的检出率在大型医院达到了30-50。l在德国，1996-2006年间MRSA的感染率不断增长达到了20-22，德国的一所大型教学医院(katharinen hospita1)MRSA感染的病例在19942003年间上升了277呼吸呼吸ICU普外消化神经外科风湿内分泌肾内心内心脏监护运动医学透析新生儿儿科老年病房外科ICU合计0.00%10.00%20.00%30.00%40.00%50.00%60.00%38.46%54.55%12.90%25.00%23.40%27.27%35.00%9.52%12.77%

5、25.00%18.18%5.41%17.65%11.76%18.18%SA%SA院内携带率普查院内携带率普查北京某三甲医院北京某三甲医院SA院内现状院内现状58.82%89.82%59.60%90.00%90.00%80.00%80.00%70.00%70.00%60.00%60.00%50.00%50.00%40.00%40.00%30.00%30.00%20.00%20.00%10.00%10.00%0.00%0.00%北京友北京友谊谊医院医院天天坛坛医院医院解放解放军军空空军总军总院院SASA阳性阳性标标本中的耐本中的耐药药率率SA耐药率现状耐药率现状MRSA多重耐药菌医院感染预防与控制

6、技术多重耐药菌医院感染预防与控制技术 指南（试行）指南（试行）2011年国家卫生部出台文件，为了进一步加强多重耐药菌医院感染预防与控制，制定了MRSA 医疗机构应积极开展常见多重耐药菌的监测。对多重耐药菌感染患者或定植高危患者要进行监测，及时采集有关标本送检，开展主动筛查，以及时发现、早期诊断多重耐药菌感染患者和定植患者。生化鉴定（乳胶凝集）生化鉴定（乳胶凝集）VS PCR快速检测快速检测金葡菌鉴定：金葡菌鉴定：耐药性鉴定：耐药性鉴定：药敏试验（药敏试验（K-B法）法）VS PCR快速检测快速检测 金葡传统临床鉴定方法金葡传统临床鉴定方法其他方法：细菌鉴定仪其他方法：细菌鉴定仪培 养分离培养药

7、敏纸片1 day2 day3 day乳胶凝集实验0 day取标本取标本PCR快速快速PCR操作流程操作流程DNA的提取快速PCR反应样本的采集2Hour4Hour！如何用如何用PCR检测检测SA&MRSA？PCR nuc SA （金葡特有的耐热核酸酶基因）（金葡特有的耐热核酸酶基因）（导致（导致SA耐药产生的耐药产生的PBP2蛋白的编码基因）蛋白的编码基因）PCR mecA MRSAPCR检测Nuc Nuc+非SAMSSAMRSAmecAmecA+检测判读流程检测判读流程Nuc FAM荧光标记mecA HEX荧光标记本试剂盒的临床应用方向治疗性应用治疗性应用为临床诊断及正为临床诊断及正确使用抗

8、菌素提确使用抗菌素提供及时有力的依供及时有力的依据，减少试验性据，减少试验性治疗对病人造成治疗对病人造成的伤害，同时为的伤害，同时为挽救生命争取时挽救生命争取时间间临床应用临床应用预防性应用预防性应用可使医院内感染的可使医院内感染的预防工作得以落实。预防工作得以落实。入院及术前的监测入院及术前的监测为预防院内传播采为预防院内传播采取措施（如隔离）取措施（如隔离）提供依据。提供依据。质量第一质量第一质量第一质量第一 服务第一服务第一服务第一服务第一本产品的检测优点本产品的检测优点 1、公认的筛查“金标准”2002年美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）指出金黄色葡萄球菌一旦检出mecA基因即可

9、定为MRSA。PCR法检测mecA基因被公认为MRSA筛查检测“金标准”。2、特异性高 现已明确，大量产生的一种新的青霉素结合蛋白-PBP2a是葡萄球菌对甲氧西林耐药的主要原因。mecA基因是PBP2a的编码基因，只存在于葡萄球菌中，因此mecA基因可作为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子标志。荧光PCR方法就是通过直接检测细菌染色体上的mecA基因来确定是否为耐甲氧西林菌株，不受药敏实验条件的影响。3、检测时间短 正确快速地检测出MRSA是寻找有效的抗菌药物和控制MRSA院内感染的关键。荧光PCR方法实验检测时间在3个小时以内，当天知道检测结果。而目前其他检测方法需2-3天的细菌培养，使检测时间

10、延长，不利于及时调整使用抗生素治疗方案和院内感染控制。质量第一质量第一质量第一质量第一 服务第一服务第一服务第一服务第一临床监测方案临床监测方案1、入院筛查 对入院患者进行对入院患者进行MRSA筛查，并采取有效的接筛查，并采取有效的接触预防措施，是控制触预防措施，是控制MRSA扩散的最有效手段扩散的最有效手段。对住院病人（尤其是ICU及烧伤科/感染科/呼吸科/老干部科等）入院时应进行MRSA检测，阳性者考虑在相对隔离。（美国加利福尼亚，伊利诺，新泽西，宾夕法尼亚，华盛顿，肯塔基等16个州政府先后立法，要求所有住院患者强制性检测，以减少院内感染，提高病床周转率，减低医疗资源的支出）。2、指导患者

11、用药 治疗过程中应定期监测，以便及时调整抗生素及治疗方案（万古霉素是首选药物）。治疗过程出现并发感染，需要定期检测，检测对象选择感染部位。本试剂盒的临床应用方向本试剂盒的临床应用方向1、治疗性应用：、治疗性应用：痰液、血标本：即时检测，快速诊断金黄色葡萄球菌痰液、血标本：即时检测，快速诊断金黄色葡萄球菌及其耐药性。如：菌血症，败血症等。及其耐药性。如：菌血症，败血症等。感染病灶标本（伤口分泌物、咽拭子、痰等）：快速感染病灶标本（伤口分泌物、咽拭子、痰等）：快速检测金黄色葡萄球菌及其耐药性。如：肺炎、伤口感染等。检测金黄色葡萄球菌及其耐药性。如：肺炎、伤口感染等。2、预防性应用：、预防性应用：鼻拭子标本：进入鼻拭子标本：进入ICU病房，进入手术易感科室病房病房，进入手术易感科室病房（骨科、外科等）前的检测，避免院内感染。（骨科、外科等）前的检测，避免院内感染。产品应用产品应用国内首个获得SFDA注册号的MRSA PCR法检测试剂盒临床开展医院：浙江大学邵逸夫医院复旦大学华山医院上海交通大学瑞金医院解放军301医院解放军307医院北京朝阳医院北京友谊医院MRSAMRSA检测报告模板检测报告模板开展科室：检验科 基因诊断室收费标准：150元（医保）收费名称：耐多药基因表达之江生物 郑 诺15101651880