血管紧张素转化酶课件.ppt

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1、血管紧张素转化酶的测血管紧张素转化酶的测定及其临床意义定及其临床意义检验科检验科概述概述血管紧张素转化酶（ACE）又称激激肽肽酶或肽基-羧羧基基肽酶，系系统统命名为肽基-二肽水解酶。属血管血管内皮内皮细细胞膜胞膜结合酶，由肽的C端将氨基酸氨基酸切为两段变换而来，可使肽链C端二肽残基水解。ACE可催化血管血管紧张紧张素素（十肽）水解成八肽的血管血管紧张紧张素素，使血管进一步收缩，血血压压升高。也可作用作用于肾肾上腺皮上腺皮质质，促进醛醛固固酮酮的分泌。因此，ACE是肾肾素素-血管血管紧张紧张素素-醛固酮的重要成分。概述概述ACE还催化具有降压作用的缓缓激激肽肽水解而失去活性。ACE广泛分布分布于

2、人体人体各组组织织，以附睾附睾、睾丸睾丸及肺的含量较丰富，其中肺毛毛细细血管血管内皮细细胞胞ACE活性最高。肾、脑脑垂体垂体等组织酶酶活性活性较低。ACE测测定方法定方法主要有比色法比色法、酶偶联法等。血管血管紧张紧张素素转换转换酶酶的的别别名名：血管紧张素转化酶：血管紧张素转化酶转换酶的测定原理血管紧张素转换酶的测定原理血管紧张素.（1）三硝基苯硝基苯磺酸钠（INBS）显色法：底物马尿酰-甘氨酰-甘氨酸甘氨酸（Hip-GlyGly-Gly）在在ACE作用下，释放出甘氨酰-甘氨酸（Gly-Gly），后者与三硝基苯磺酸（TNBS）作用，生成黄色的三硝基苯-甘氨酰-甘氨酸（TNP-Gly-Gly）

3、其含量与ACE活性呈正相关相关。（2）酶偶联法：ACE使底物马尿酸尿酸双甘肽（Hip-Gly-Gly）水解成马尿酸（Hip）和双甘肽（Gly-Gly），后者与L-谷氨酰-3-羧基-4-4-硝基苯胺硝基苯胺（GGCN）和-谷氨酰基转移谷氨酰基转移酶酶（GGT）偶联，形成3-羧基-4-硝基苯胺，在340nm处测其吸光度，以反映ACE活性。试剂试剂 （1 1）三硝基苯磺酸钠（）三硝基苯磺酸钠（INBSINBS）显色法：）显色法：底物液：用底物液：用5mmol/L5mmol/L的的TrisTris溶液溶液配制配制30mmol/L HGG30mmol/L HGG溶液，此液中含溶液，此液中含0.4mol

4、/L0.4mol/LNaNa2 2SOSO4 4、0.3mol/L 0.3mol/L NaClNaCl，调，调pH7.3pH7.3。0.1mol/0.1mol/L L硼酸硼酸盐盐缓缓冲液冲液（pH9.0pH9.0）。）。100g/L100g/L钨酸钠（含钨酸钠（含2 2个水）溶液。个水）溶液。0.33mol/L NaSO0.33mol/L NaSO4 4。60mmol/L TNBS60mmol/L TNBS溶液溶液（2 2）酶偶联法：）酶偶联法：50mmol/L HEPES50mmol/L HEPES缓冲液：称羟、乙基缓冲液：称羟、乙基哌嗪哌嗪乙磺酸（乙磺酸（HEPESHEPES）1.191g

5、1.191g，加双，加双蒸蒸馏馏水水100ml100ml溶解溶解，用于配制，用于配制GGTGGT、CGCNCGCN和和基基质质缓冲液。缓冲液。20kU/L GGT20kU/L GGT贮存液：取贮存液：取HEPESHEPES缓冲液缓冲液5ml5ml，加入，加入GGT 100UGGT 100U，混匀后分装小瓶，混匀后分装小瓶，2020。保存保存。6.7kU/L GGT6.7kU/L GGT应用液：将上述贮存液用二倍量的应用液：将上述贮存液用二倍量的HEPESHEPES稀释配制。稀释配制。0.1mmol/L GGCN0.1mmol/L GGCN溶液：称溶液：称GGCN 20mgGGCN 20mg，加

6、入，加入50mmol/L HEPES 60ml50mmol/L HEPES 60ml，溶解后，溶解后4 4保存。保存。基质缓冲液：称基质缓冲液：称HEPES 1.191gHEPES 1.191g，NaClNaCl 1.755g 1.755g，NaNa2 2SOSO4 45.68g5.68g，用双蒸馏水，用双蒸馏水溶解后，用溶解后，用NaOHNaOH调调pHpH至至8.08.0，再补充双蒸馏水至，再补充双蒸馏水至100ml100ml，4 4保存。保存。基质液：由基质液：由Hip-Hip-GlyGly-GlyGly 89.5mg 89.5mg加基质缓冲液加基质缓冲液10ml10ml溶解混合而成。此

7、液各溶解混合而成。此液各试剂终浓度为：试剂终浓度为：HEPES 50mmol/LHEPES 50mmol/L，NaClNaCl 30mmol/L 30mmol/L，NaNa2 2SOSO4 4400mmol/L400mmol/L，Hip-Hip-GlyGly-GlyGly 30mmol/L 30mmol/L。10mmol/L10mmol/L双甘肽标准液：称双甘肽标准液：称Gly-GlyGly-Gly 52.9mg 52.9mg加双蒸馏水溶解，并稀释至加双蒸馏水溶解，并稀释至100ml100ml，此为贮存液（，此为贮存液（40mmol/L40mmol/L）。）。1 1份贮存液和份贮存液和3 3份

8、双蒸馏水混合即为应用液。份双蒸馏水混合即为应用液。正常值正常值（1 1）三硝基苯磺酸钠（）三硝基苯磺酸钠（INBSINBS）显色法：）显色法：26.126.156.7kU/L56.7kU/L。（2 2）酶偶联法：）酶偶联法：12-68U/L12-68U/L。化验结果临床意义化验结果临床意义血清ACE测定主要同于肺部疾病的诊断，对其他系统疾病的诊疗也有一定价值。(1)肺部疾病：绝大多数结节结节病病患者患者血清ACE活力升高，其阳性率及幅度与病活活动动与否和病变累及的范围有关。肺肺结结核核也可升高，而哮喘哮喘发作、急性心原性肺水肺水肿肿、慢性阻塞性肺疾患、自自发发性气胸性气胸、肺纤维纤维化、成人呼

9、吸窘迫成人呼吸窘迫综综合征合征等血清ACE均有不同程度下降。（2）肝肝脏脏疾病：多数肝脏病患者ACE活性升高，升高幅度依次为肝硬化肝硬化、急性肝炎、慢性肝炎。脂肪肝脂肪肝则正常。（3）甲状腺甲状腺疾病：甲亢甲亢患者ACE活性明显高于其他甲状腺疾病，且酶酶活力活力高低与T3、T4含量呈正相关。（4）其他：糖尿病糖尿病、虹膜炎、免疫免疫母细胞肉瘤肉瘤等，血清ACE升高；高血高血压压、结肠结肠炎等则降低。附注附注（1 1）三硝基苯磺酸钠（）三硝基苯磺酸钠（INBSINBS）显色法：）显色法：标标本本在室温或冰箱存放在室温或冰箱存放1 1周，酶活力无明显变化，周，酶活力无明显变化，1515保存保存3

10、3周酶活性周酶活性稳稳定定。胆胆红红素素对对ACEACE有明显有明显抑制抑制作用，故重度作用，故重度黄疸黄疸可使测定结果偏低。可使测定结果偏低。EDTAEDTA是是ACEACE的强抑制剂，的强抑制剂，NaClNaCl和和NaNa2 2SOSO4 4对对ACEACE有明显的活化作用，有明显的活化作用，溶血溶血、脂血对结果无影、脂血对结果无影响。响。本法与本法与紫外分光光度法紫外分光光度法酶活力单位一致，但其酶活力单位一致，但其测测得得值值为紫外法的为紫外法的9 9倍。倍。（2 2）酶偶联法：）酶偶联法：当底物当底物pH 8.0pH 8.0，GGCN 1.0mmol/LGGCN 1.0mmol/L

11、GGT6.7ku/LGGT6.7ku/L时，时，ACEACE活性与吸光度值有良活性与吸光度值有良好好线线性性。线性范围大，即使。线性范围大，即使ACEACE在在1500U/L1500U/L，不用不用稀释也可获得稀释也可获得理想理想结果。结果。GGCNGGCN浓度选择：本浓度选择：本反反应应体系中体系中GGCNGGCN既是测定酶既是测定酶ACEACE的的受体受体，又是指示酶，又是指示酶GGTGGT的供体。以的供体。以1.0mmol/L1.0mmol/L的的GGCNGGCN最理想，在此浓度下最理想，在此浓度下GGCNGGCN与吸光度与吸光度保持保持良好的线良好的线性。性。GGTGGT对测定的影响

12、本反应利用对测定的影响：本反应利用GGTGGT将双甘肽与将双甘肽与GGCNGGCN偶联，生成黄色的偶联，生成黄色的3-3-羧羧基基-4-4-硝基苯胺，其加入量可直接影响测定结果。硝基苯胺，其加入量可直接影响测定结果。GGTGGT高浓度可使底物过度消高浓度可使底物过度消耗，使吸光度偏离曲线；低浓度耗，使吸光度偏离曲线；低浓度GGTGGT又使吸光度偏低，又使吸光度偏低，灵敏度灵敏度不高。每次加入不高。每次加入0.335 U GGT0.335 U GGT，可获得理想吸光度与线性。在此浓度下，酶基质液的空白管吸，可获得理想吸光度与线性。在此浓度下，酶基质液的空白管吸光度光度0.1A0.1A。相关疾病相关疾病结节病、肺结核、肺水肿、自发性气胸、结节病、肺结核、肺水肿、自发性气胸、气胸气胸、肝硬化、肝硬化、脂肪肝、糖尿病、肉瘤、黄疸脂肪肝、糖尿病、肉瘤、黄疸THANKS