从业人员健康体检沙门氏菌志贺氏菌检测操作程序.doc
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1、从业人员健康体检沙门氏菌、志贺氏菌检测操作程序一、目的 本程序用于对从业人员健康体检进行沙门氏菌、 志贺氏菌检测等致病 菌检测 的方法,以规范操作程序,保证检测数据的有效性。二、适用范围: 本方法适用于从人体粪便中沙沙门氏菌、 志贺氏菌的分离、 鉴定及保 存的梯相关操作。三、生物安全要求标本及相应的致病菌操作必须在 BSL-2 生物安全实验室的生物安全 柜中进行。四、试剂及仪器设备试剂采便盒、Cary-Blair运送培养基、亚硒酸增菌液(SF)、改良亚硒酸 盐磺绿增菌肉汤(SBG、沙门志贺培养液、木糖-赖氨酸-脱氧胆酸琼 脂(XLD、麦康凯琼脂、沙门显色培养基、结晶紫沙门培养基(YS、 三糖铁
2、TSI)、动力-吲哚-尿素培养基(MIU)、沙门氏菌属诊断血清、 志贺氏菌属诊断血清、API20E生化试剂条、磁珠菌种保存管仪器设备恒温培养箱、微生物鉴定仪五、采样方法标本应为新鲜的或转移至 Cary-Blair 运送培养基的粪便或肛拭子, 最优标本是转移到 Cary-Blair 运送培养基的粪便拭子。肛拭子不是 最佳标本,仅在病人无粪便标本时采用。粪便标本:应采集自然排出的新鲜粪便,取稀水样、粘血样、脓血样,黏液样部分。盛于清洁、干燥、无吸水性的无菌容器,避免混入 尿液、水和其他物质。肛拭标本:若无法获得粪便(如排便困难或婴幼儿),也可以采用肛 拭子,即无菌棉拭子用生理盐水湿润后,插入肛门
3、内4-5cm处儿童约2-3cm),同一方向轻轻旋转2-3周。以目测能见到粪便为准。插 入Cary-Blair 运送培养基。标本采集后立即送至实验室进行检测,若室温保存,不能超过1h;如不能立即送检,应放入Cary-Blair运送培养基中冷藏条件下24小 时内送检。六、检验程序七、操作步骤分别标记一个XLD平板(或YS平板、麦康凯平板)和1管9ml 改良亚硒酸盐磺绿增菌肉汤(SBG(或SF增菌液或沙门志贺培养液)。用 1 个无菌拭子取少量标本(不要使拭子 粘得太多,尽量从可 见血或黏液的部位收集)接种在XLD平板的第一区,接着把拭子放入 SBG曽菌液。再灭菌接种环在 XLD平板的其余区进行划线接
4、种。如果 是 Cary-Blair 运送培养基的粪便拭子,则轻搅混合标本后接种增菌 液与平板。所有培养基均放入36C士 1C培养,SBG勺最佳增菌时间是16 18h(建议每天下午45时接种标本,第二天早上810时用增菌液划 平板)。观察平板:取培养后的平板,观察有无可疑菌落。7.4.1 XLD 平板可疑菌落观察:志贺菌在 XLD平板上为粉红或无 色、透明、光滑、湿润、边缘整齐、圆形菌落,直径1-2mm而大部分的大肠杆菌类的菌落为黄色、混浊、凸起、湿润、边缘整齐或不规 则,直径2-3mm大多数沙门菌在XLD平板上中心黑色的透明、光滑、 湿润、边缘整齐、圆形的菌落。 (图 2)742 YS平板可疑
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