输血科唾液中的A、B、H、Lea和Leb抗原检测操作规程.docx

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1、输血科唾液中的A、B、H、Lea和Leb抗原检测操作规程1、目的：规范实验室工作人员的操作程序，确保实验过程及结果的准确性与可靠性。2、范围：本规程适用于本实验室凝集抑制试验操作。3、职责3.1工作人员应对凝集抑制试验技术操作熟悉掌握。4、程序4.1基本原理抗体能与有相应抗原的红细胞发生特异性凝集，体液中的可溶性抗原物质能与该抗体发生特异性中和，抑制了抗体凝集红细胞的作用。用这种可溶性物质来抑制抗体与红细胞凝集作用的试验称为凝集抑制试验。大约有78%的个体具有Se基因，它控制着产生水溶性的ABH抗原的分泌腺体。这些ABH抗原能够进入除脑脊液外的所有体液中。这种分泌型抗原可通过对ABH和Lewi

2、s抗血清的抑制实验，证明这些抗原存在于唾液中。适用于ABO亚型的诊断。4.2唾液标本的制备4.2.1在一个小烧杯或敞口试管中收集5-10ml唾液。大多数人可以在几分钟内积累到这一数量。为了促进唾液分泌，提供唾液的人可以咀嚼蜡、石蜡或橡皮带等物，但不能是口香糖或任何含糖或蛋白质的助咀嚼物。4.2.3将上清液转移到一个干净试管中,放入沸水浴8-10分钟,以便使唾液淀粉酶失活。4.2.4重新于900-1000g离心唾液8-10分钟，留取上清液于另一试管中。4.2.5如果试验要在几小时内完成，可将样品4冷藏。若试验不能在一天完成，则将标本保存在-20。冻存标本活力可保持数年。4.3材料1）人（多克隆）

3、抗-A和抗-B,或单克隆抗-A、抗-B（但必须经验证具有抑制活性）。2）欧洲荆豆提取抗T凝集素，或单克隆抗-H试剂。3）多克隆（鼠/羊）抗-Lea。4） AI和B型红细胞。5）。型Le（a+b-）红细胞。与抗体检测和抗体识别的用法相同6）标本：冷冻的或新鲜的，唾液分泌的或非分泌的，用于阳性或阴性对照。4.4血清的修正4.4.1倍比稀释相应的血型试剂：4.4.2每1滴血型试剂稀释液加1滴2%-5%的红细胞盐水悬液。用Al、B、0型红细胞分别检测抗-A、抗-B、抗-H,。型Le（a+b-）红细胞检测抗-Lea。4.4.3混合标本于900-1000g离心15秒，肉眼观察凝集结果。4.5分泌型的抑制试

4、验4.5.1在4只试管中，分别滴1滴适当稀释的血型试剂。检测ABH抗原，试管上标记：“分泌”、“非分泌”、“盐水”、“待检”。检测Lewis抗原,应标记“Lewis阳性”、“Lewis阴性”、“盐水”、“待检”。4.5.2在“分泌”、“非分泌”、“待检”管中分别加1滴经适当处理的唾液，在“盐水”管中加1滴盐水。4.5.3混匀，室温孵育8-10分钟4.5.4根据检测的目标抗原,每管中1滴相应的2%-5%AlB、O红细胞盐水悬液。O型Le（a+b-）红细胞对应Lewis分泌型。4.5.5混匀，室温孵育30-60分钟。4.5.6标本于900-1000g离心15秒，肉眼观察凝集结果。4.6结果及分析4

5、6.1指示细胞与抗体发生凝集反应说明唾液中不含相应抗原。4.6.2指示细胞与抗体不发生凝集反应说明唾液中含有相应抗原。4.6.3盐水对照管的抗体未与指示细胞凝集，则唾液试验结果无效。这常常是由于试剂的稀释倍数太大，需重新确定最适稀释度并按上述步骤重复试验。4.6.4解释见表1和表2表1唾液凝集抑制试验结果分析1应用抗T被检唾液分泌型唾液（存在H物质）非分泌型唾液（不存在H物质）盐水对照结果分析2+02+2+H非分泌型OO2+2+H分泌型表2唾液凝集抑制试验结果分析2应用抗-Le?被检唾液Le阳性唾液Le阴性唾液盐水对照结果分析2+O2+2+Lewis阴性OO2+2+Lewis阳性4.7注意事

6、项4.7.1用已知分泌型(Se)和非分泌型(Se)者的唾液对照。对于Lewis检测，使用红细胞为Le(a+b-)或Le(a-b+)的人的唾液作为阳性对照，用Le(a-b-)的人的唾液作为阴性对照。已知唾液分泌型人的唾液经处理后可冻存，以便日后使用。对于ABH物质测定，应用经检验为Se和Se人的唾液;对于LeWiS试验,应用Le(a+b-)或Le(a-b+)表现型的人红细胞作为阳性对照。阴性对照是Le(a-b-)的红细胞。试剂对照用盐水。LewiS阳性者被证明是ABH分泌者，可以假定其唾液也含有Lea和Leb物质，若Lea阳性者是ABH非分泌型，缺乏Se基因，则在唾液中仅有Lea4.7.2这种筛选过程适用于通过检测一系列盐水稀释的唾液，能得到血型物质反应能力的半定量检测。需要抑制活力的稀释度越高,唾液中的血型物质含量就越高。在与抗体一起孵育之前，要稀释唾液。为了检出或测量唾液中除H物质外的A或B物质，可以用稀释过的抗-A或抗-B试剂进行同一操作。抗-A或抗-B的最适稀释度可以分别用Al或B细胞滴定抗血清的方法决定。4.7.3一个表现为ABH分泌型的Lewis阳性个人可以用确定唾液中的Lea的方法确定Leb,即LeWiS阳性，同进又为ABH分泌型人,其唾液中应有Lea和Leb血型物质。表型Le(a+)、基因型sese、不分泌ABH物质的人，其唾液中只有Lea血型物质。