发酵工艺课程设计.docx
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1、课程设计发酵工程学生姓名:学院:生命科学学院系别:生物工程系班 级:学 号:指导教师:日 期: 2012年6月目录1前言41.1液体深层发酵41.1.2分批补料发酵41.1.3连续发酵法41.2连续培养41.2.1 恒浊连续培养41.2.2恒化连续培养42发酵工艺流程53菌种 53.1菌种名称53.2菌种简介 53.2.1菌种形态133.2.2功能特性错误!未定义书签。3.2.3 作用机理53.2.4菌种用途错误!未定义书签。3.3菌种培养参数的选择63.3.1最佳生长时间选择63.3.2最佳接种量的选择错误!未定义书签。3.3.3最佳装液系数的选择错误!未定义书签。3.3.4工艺流程简图84
2、设计依据94.1总体生产规模94.2基本发酵工艺流程94.3发酵工艺设计理论参数94.4菌种的活化94.5种子液制备154.6种子培养94.6.1 一级培养94.6.2二级培养94.6.3三级培养185发酵工艺流程与设备流程设计195.1主发酵罐选定195.2种子罐选定错误!未定义书签。5.2.1二级种子罐错误!未定义书签。5.2.2 一级种子一摇瓶数量型号选择错误!未定义书签。06空气压缩机的选择117锅炉的选择118实际确定的发酵设备选择推算结果参数汇总129 主发酵罐详细尺寸设计129.1机械搅拌通风发酵罐129.1.1通用型发酵的几何尺寸比例129.1.2 罐体129.1.3搅拌器和挡
3、板129.1.4 轴封139.2发酵罐139.2.1发酵罐的选型139.2.2主要尺寸的计算139.2.3冷却面积的计算149.2.4搅拌器计算149.2.5搅拌器功率计算159.2.6设备结构的工艺计算169.2.7设备材料的选择179.2.8发酵管壁厚的计算189.2.9接管设计189.2.10支座选择1910设备流程简图错误!未定义书签。911参考文献201、前言1.1液体深层发酵深层液体培养法也叫液体深层发酵法,它是目前发酵工业上常用的一种发酵方 法。根据操作方法的差异,液体深层发酵法又可以分为分批发酵法、分批补料发 酵法和连续发酵法.连续培养装置的一个主要参数是稀释率(D),它的定义
4、为:D 二 F/V =流动速率/容积。1.1.1分批发酵法。此法是指一次性地向发酵罐中投入培养液,发酵完毕后, 又一次性地放出原料的发酵方法。放料后再重复投料、灭菌、接种、发酵等过程。 在这一过程中,菌种的生长可分为调整期、对数期、稳定期和衰亡期四个时期。1.1.2分批补料发酵法。此法是指在分批发酵中,间歇或连续补加新鲜培养 基的发酵方法。所补的原料可以是全料,也可以是氮源、碳源等,目的是延长代谢产物的合成时间等。用这种方法生产青霉素,使生产效率提高了 20%。1.1.3连续发酵法。此法是指向发酵罐连续加入培养液的同时,连续放出老 培养液的发酵方法。其优点是设备利用率高、产品质量稳定,便于自动
5、控制等, 缺点是容易污染杂菌。这种技术已用于生产酵母菌菌体、乙醇、乳酸、丙酮 丁醇,以及石油脱蜡、污水处理等.1.2连续培养将微生物置于一定容积的培养基中,经过培养生长,最后一次收获,此称分 批培养(Batch culture)。通过对细菌纯培养生长曲线的分析可知,在分批培养 中,培养料一次加入,不予补充和更换。随着微生物的活跃生长,培养基中营养 物质逐渐消耗,有害代谢产物不断积累,故细菌的对数期不可能长时间维持。如 果在培养器中不断补充新鲜营养物质,并及时不断地以同样速度排出培养物(包 括菌体及代谢产物),从理论上讲,对数生长期就可无限延长。只要培养液的流 动量能使分裂繁殖增加的新菌数相当于
6、流出的老菌数,就可保证培养器中总菌量 基本不变,此种方法就叫连续培养法。连续培养方法的出现,不仅可随时为微生 物的研究工作提供一定生理状态的实验材料,而且可提高发酵工业的生产效益。 最简单的连续发酵装置包括:培养室、无菌培养基容器以及可自动调节流速(培养基流入,培养物流出)的控制系统,必要时还装有通气、搅拌设备。连续培养装置的一个主要参数是稀释率(D),它的定义为:D = F/V =流动速率/ 容积1.2.1恒浊连续培养不断调节流速而使细菌培养液浊度保持恒定的连续培养方法叫恒浊连续培养。在 恒浊连续培养中装有浊度计,借光电池检测培养室中的浊度(即菌液浓度),并根 据光电效应产生的电信号的强弱变
7、化,自动调节新鲜培养基流入和培养物流出培 养室的流速。当培养室中浊度超过预期数值时,流速加快,浊度降低;反之,流 速减慢,浊度增加,以此来维持培养物的某一恒定浊度。如果所用培养基中有过 量的必需营养物,就可使菌体维持最高的生长速率。恒浊连续培养中,细菌生长 速率不仅受流速的控制,也与菌种种类、培养基成分以及培养条件有关。恒浊连续培养,可以不断提供具有一定生理状态的细胞,得到以最高生长速率 进行生长的培养物。在微生物工作中,为了获得大量菌体以及与菌体相平行的代 谢产物时,使用此法具有较好的经济效益。1.2.2恒化连续培养控制恒定的流速,使由于细菌生长而耗去的营养及时得到补充,培养室中营养物 浓度
8、基本恒定,从而保持细菌的恒定生长速率,故称恒化连续培养,又叫恒组成 连续培养。已知营养物浓度对生长有影响,但营养物浓度高时并不影响微生物的 生长速率,只有在营养物浓度低时才影响生长速率,而且在一定的范围内,生长 速率与营养物的浓度成正相关,营养物浓度愈高,则生长速率也高。恒化连续培养的培养基成分中,必须将某种必需的营养物质控制在较低的浓度, 以作为限制因子,而其他营养物均为过量,这样,细菌的生长速率将取决于限制 性因子的浓度随着细菌的生长,限制因子的浓度降低,致使细菌生长速率受到限 制,但同时通过自动控制系统来保持限制因子的恒定流速,不断予以补充,就能 使细菌保持恒定的生长速率。用不同浓度的限
9、制性营养物进行恒化连续培养,可 以得到不同生长速率的培养物。2. 发酵工艺流程保藏枯草芽孢杆菌的菌种一平板划线培养一挑取单菌落一菌种摇 瓶培养一种子扩大培养一主发酵一半成品3菌种简介3.1菌种名称菌种名称:枯草芽孢杆菌拉丁学名 :Bacillus subtilis (Ehrenberg) Cohn3.2菌种简介3.2.1菌体形态枯草芽孢杆菌,是芽孢杆菌属的一种。单个细胞0.70.8x23微米,着色均 匀。无荚膜,周生鞭毛,能运动。革兰氏阳性菌,芽孢).60.9x1.01.5微米, 椭圆到柱状,位于菌体中央或稍偏,芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透 明,污白色或微黄色,在液体培养基中生长时,
10、常形成皱醭。需氧菌。可利用蛋 白质、多种糖及淀粉,分解色氨酸形成吲哚。在遗传学研究中应用广泛,对此菌 的嘌吟核苷酸的合成途径与其调节机制研究较清楚。广泛分布在土壤及腐败的有 机物中,易在枯草浸汁中繁殖,故名。3.2.2功能特性1、能调节动物肠道菌群平衡,改善肠道微生态环境,促进动物生长和提高抗 病力。2、在不利环境条件下能以孢子形式存在,在饲料制粒、贮存及胃酸环境中仍 能保持高活性。3、能刺激动物免疫器官的生长发育,激活淋巴细胞,提高免疫球蛋白和抗体 水平,增强细胞免疫和体液免疫功能,提高机体免疫力。4、能自身合成消化性酶类,如蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶和纤维素酶等,与 内源消化酶共同发挥作用,促
11、进养分的消化吸收。文章以一株枯草芽孢杆菌为研 究对象,对其摇瓶发酵培养基及发酵条件进行优化,为其规模化发酵提供依据。3.2.3作用机理1、 枯草芽孢杆菌菌体生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、 短杆菌肽等活性物质,这些活性物质对致病菌或内源性感染的条件致病菌 有明显的抑制作用;2、枯草芽孢杆菌迅速消耗环境中的游离氧,造成肠道低氧,促进有益厌 氧菌生长,并产生乳酸等有机酸类,降低肠道 PH值,间接抑制其它致病菌 生长;3、刺激动物免疫器官的生长发育,激活 T、B淋巴细胞,提高免疫球蛋 白和抗体水平,增强细胞免疫和体液免疫功能,提高群体免疫力;4、枯草芽孢杆菌菌体自身合成 a -淀粉酶、
12、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶 等酶类,在消化道中与动物体内的消化酶类一同发挥作用;5、能合成维生素B1、B2、B6、烟酸等多种B族维生素,提高动物体内十 扰素和巨噬细胞的活性。3.2.4菌种用途1、该菌种对特殊菌体进行促芽孢和微胶囊包被处理,在孢子状态下稳定 性好,能耐氧化;耐挤压;耐高温,能长期耐 60C高温,在120C温度 下能存活20分钟;耐酸碱,在酸性胃环境中能保持活性,可以耐唾液和胆汁的攻击,是饲料微生物中可100%直达大小肠的活菌。2、枯草芽孢杆菌以孢子状态进入消化道后,迅速由休眠状态复活,在短 期内繁殖成高含菌量的优势种群,消耗掉肠道内大量氧气,并能产生过氧 化氢、细菌素,建立微生态
13、平衡,促进有益厌氧微生物的繁殖,抑制有害 细菌(大肠杆菌、沙门氏杆菌)的生长,从而预防腹泻、下痢等肠胃道疾 病。3、在快速繁殖过程中,产生大量多种维生素、有机酸、氨基酸、蛋白酶 (特别是碱性蛋白酶)、糖化酶、脂肪酶、淀粉酶,能降解植物性饲料中复杂的有机物,从而促进消化吸收,提高饲料利用率,防止动物消化不良, 出现“饲料便”等状况发生。4、该菌种安全高效,无药残,无毒副作用,能减少抗生素药物的使用, 增强免疫力。同时缓解动物不进食,生长缓慢等不良应激反应状态,恢复 由于用药造成的动物体质下降,提高疫苗抗体水平等综合抗病力。5、除臭驱蝇,减少污染,控制细菌性疾病,能减少粪便中氮、磷、钙的 排泄量,
14、减少粪便臭味及有害气体排放,表现为动物粪便臭味逐步减轻, 减少饲料蛋白质分解为氨气浪费,从而减少环境污染。6、改善肉蛋奶品质,生产“绿色肉”、“农家蛋”、“无抗奶”,本品 通过增强消化吸收功能,充分吸收利用饲料中营养成份及原料的天然色素, 无需添加化学色素苏丹红、加丽素红造成对人体的有害物质及影响畜禽产 品天然食用风味,可媲美家养畜禽肉。能天然增加动物产品着色度和食用 风味,猪只皮肤红润,毛色发亮;肉鸡肉鸭颜色加深;改善蛋壳的质量和 颜色,蛋清厚稠,蛋黄鲜红;水产动物颜色更加健康,无斑点。3.3菌种培养参数的选择3.3.1最佳生长时间的选择由下图可知,发酵培养02 h为枯草芽孢杆菌的生长停滞期
15、细菌数量极少; 自2 h以后进入对数生长期,菌体数量急剧增多;在12 h达到生长高峰期, 812 h为枯草芽孢杆菌生长的稳定期,菌体生长缓慢。自12 h后细菌数量开 始减少,枯草芽孢杆菌进入生长衰亡期。因此,采用812 h时的菌液作为菌 种较合适,此时枯草芽孢杆菌为对数生长末期,既可保持高的细胞活力,又可 获得尽可能多的细胞数。3.3.2最佳接种量的选择分别选取1 %、3 %、5 %、7 %和9 %5个接种量,在摇瓶发酵培养条件 下培养12 h,用稀释平板计数法测其活菌数。由下图可知,枯草芽孢杆菌生长 的最适接种量为3%,在1 %9 %范围内时,接种量对枯草芽孢杆菌活菌数的影 响差异很小。2
16、5接种lit/%m X 一源遂*3.3.3最佳装液系数的选择选取20、40、60、80和100 mL 5个装液量分别测定不同装液量对发酵液 活菌数的影响,在摇瓶发酵培养条件下培养12 h ,用稀释平板计数法测其活菌 数。-JE n宜二o - X 混定01120406080(00装液tf/mL3.3.4工艺流程简图房i声1PH谒节液。0空欠过潇器 通靖养革厩料 m去雀体分离及后处理4设计依据4.1总体生产规模单批次液体深层发酵0.5吨枯草芽孢杆菌的发酵4.2基本发酵工艺流程保藏枯草芽孢杆菌的菌种一平板划线培养一挑取单菌落一菌种摇瓶 培养一种子扩大培养一主发酵一半成品4.3发酵工艺设计理论参数、
17、发酵培养类 型理论接种比 例理想接种比 例理论装液系 数理想装液系 数三角瓶1-10%1-3%8-20%8%发酵罐 1-10%1-3%60-85%60-70%发酵级别理论接种比例理想接种比例发酵液 总量实际接种 比例生产发酵1%-10%3%500L3%二级种子1%-10%3%15L3%一级种子1%-10%3%450mL3%4.4菌种的活化将冷冻保藏管中的菌种在斜面中活化(37C 24h),并在平板中进行纯化(37C 24h)。4.5种子液制备取一环纯化后的的菌种,放入液体培养基中,置于180r/min中摇床中培养 (37 C 18h)。4.6种子培养4.6.1 一级培养将20mL的种子液接入装
18、有500mL液体培养基三角瓶中,37C, 180r/min培 养 12h。4.6.2二级培养将450mL的一级培养的种子液接入装有20L培养基的30L种子罐中,37C, 180r/min 培养 12h。4.6.3三级培养将15L的二级培养种子液接入装有500L发酵液的800L发酵罐中,180r/min 培养12h。五、发酵工艺流程与设备流程设计五、5.1主发酵罐的选定我所设计的是单批次500L,故根据500L的生产产量,以及发酵罐的理论装液系 数的范围在60%-70%进行生产发酵罐容积的计算,接种量按3%计算。因为考虑到 产品供应的市场的边际收益和成本问题,计算如下:3%X500L=150L
19、500:60%=833.3L500L:70%=714.3L生产发酵罐的选择范围在714.3L-833.3L根据发酵罐的规格,所以选择800L的发酵罐进行生产500L:800L=62.5%此时实际装液率为62.5%5.2种子罐的选定5.2.1二级种子罐根据枯草芽孢杆菌的接种量的理论范围1-10%,以及对理想接种量3%的考虑,同 时考虑二级种子罐的规格大小15LX3%=450mL15L:60%=25L15L:70%=21.4L以及发酵罐的选择范围是21.4L-25L根据种子罐的规格,选择25L的一级种子罐进行生产15L:25L=60%此时实际装液率为60%5.2.2 一级种一一摇瓶数量型号的选择根
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