2025年基孔肯雅热实验室检测技术方案精选集锦.docx
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1、2025年基孔肯雅热实验室检测技术方案依据基孔肯雅热防控技术指南(2025年版)及病原检测最新进展编制一、检测对象与标本管理规范检测对象分类疑似病例:发病前12天内有流行区旅居史,且出现急性发热(38)伴皮疹或关节剧痛(以腕/踝关节压痛为特征)者。临床诊断病例:疑似病例基础上血清特异性IgM抗体阳性。重点筛查对象:入境健康巾报有症状人员(发放就诊方便卡)l11类地区“登革热样病例”(体温38。伴皮疹/关节痛且无呼吸道症状)。聚集性疫情关联人群(同一地点14天内N3例)。标本采集与转运表:基孔肯雅热检测标本类型及采集要求标本类型采集时机采集量处理要求保存条件急性期血清发病1周内非抗凝血5ml4c
2、静置析出血清,3OOOrpm离心IOmin4保存S72h;- 20。C短期;- 70。C长期恢复期血清发病2-3周同急性期同急性期处理- 70。C避免反复冻融全血/血浆发病S5天EDTA抗凝管3ml分离血浆需2h内完成-70。C保存,避免溶血伊蚊标本疫情暴发期成蚊及幼虫各20只75%乙醇浸泡固定4C运输,-7OC保存转运要求: 血清/血浆标本采用三重包装系统(主容器+吸水材料+硬质外包装),符合UN3373生物安全标准 冰链维持2-8。C(常温运输需加入病毒保存液) 附标本送检单注明发病日期、旅行史及初步症状二、检测方法与技术标准血清学检测检测原理与流程IgM抗体检测:方法:捕获ELlSA法(
3、MaC-ELISA)、免疫层析法(胶体金)窗口期:发病4天后检出,阳性提示急性感染操作要点:避免类风湿因子干扰(建议ELISA法)IgG抗体检测:方法:间接ELlSA、免疫荧光法(IFA)意义:恢复期阳性提示既往感染;确诊需恢复期较急性期滴度为倍升高2.2病原学检测核酸检测(实时荧光RT-PCR)靶基因:病毒E1/E2结构蛋白编码区引物探针序列(2025年更新版):CHlKV-F:51TGGGCTTCGACATACCTCTG-3CHlKV-R:5,-CCTTTGTGAAGCTGTTGGTG-3,CHlKv-PrFAM-AGccTGGGCTCATCGTCAAC-BHQl性能要求:灵敏度S200c
4、opiesmL(达安基因、明德生物试剂已验证)特异性:与登革热、寨卡病毒无交叉反应结果判读:Ct值S37:阳性Ct值37-40:灰区(建议复测或测序确认)阴性:无扩增曲线病毒分离 细胞系:Vero(ArCCCCL-81)、C6/36(蚊源细胞) 操作流程:.标本接种细胞monolayer.33oC(C6/36)或37。C(Veto)培养5-7天.观察细胞病变效应(CPE):Vero细胞出现圆缩、脱落.免疫荧光法(IFA)鉴定病毒抗原 适用范围:发病5天的高病毒载量样本(分离率80%)2.3病毒基因组测序2.3.1 测序负略选择平台类型代表设备适用场景技术参数短读长测序华大智造DNBSEQ-Ti
5、大规模溯源24h完成PE150,覆盖深度NlOx长读长测序CycloneSEQ快速入境筛查实时纳米孔测序,6h出初步结果靶向测序IlluminaiSeqlOO首例本地病例覆盖E2/E1基因突变热点区域2.3.2 生信分析流程.数据质控:FaStQC剔除低质量序列(Q20N90%).基因组组装:SPAdeS拼接(覆盖度N98%).分型分析:构建系统发育树(参考株:东非型S27、亚洲型ECSA)关键突变注释:E1-A226V(白纹伊蚊适应性突变)三、质量控制与生物安全质量保证体系室内质控:O每批次实验包含阴性对照(PBS)、阳性对照(灭活病毒培养物)。临界值质控品(Ct值35-38)验证检测灵敏
6、度室间比对:Ol类地区每月参加中国疾控中心室间质评。使用复星医药、翌圣生物等商用质控品生物安全防护实验室等级要求:BSL-2:血清学检测、核酸提取前灭活处理BSL-3:病毒分离培养、未经灭活样本的核酸提取职业暴露处置:.皮肤接触:立即用70%乙醇擦拭,0.5%次氯酸钠冲洗.锐器伤:挤出伤口血液,碘伏消毒,报告并监测体温14天.气溶胶泄漏:紫外照射30min,l%过氧乙酸喷雾四、结果报告与临床解释报告流程及时限初筛阳性:1小时内电话报告属地疾控中心最终报告:PCR检测:收样后6小时内IgM检测:收样后12小时内全基因组测序:收样后48小时内网络直报:确诊病例24小时内录入“中国疾病预防控制信息系
7、统”结果解释要点表:基孔肯雅飘实验室结果临床解读检测结果组合临床意义处置建议RT-PCR阳性急性期感染(病毒血症)立即防蚊隔离,启动疫点处置IgM阳性+IgG阴性急性期早期感染结合病程4天可临床诊断IgM阳性+IgG阳性近期感染(2-12周)补充恢复期血清抗体滴度IgG阳转或4倍升高确诊依据流行病学调查溯源病毒分离阳性确诊金标准毒株送国家病毒库保藏n。特殊情形处理: 核酸检测假阴性:发病7天病毒载量下降,建议抗体检测 抗体窗口期:发病4天IgM未检出,需动态监测五、检测技术新进展与应用快速检测平台 微流控芯片技术:明德生物“一管多检”试剂盒:同步检测登革热、寨卡病毒、基孔肯雅病毒检测时间S70
8、分钟,灵敏度98.2%5 CRlSPR-CasHa快速检测:华大基因PTseqTMpius系统:室温30分钟肉眼判读结果适用于基层现场筛查自动化整合方案 全流程系统:翌圣生物AP-96N提取仪:20分钟完成96样本处理复星诊断全自动PCR仪:60分钟输出结果质控品创新 冻干球质控品(翌圣HifairLyo-Ready):37。C稳定性N14天,适合野外移动实验室含内标基因(RNaSeP)监控提取效率六、应急处置与流程优化聚集性疫情检测路径n类地区每300万人口21套PCR系统区域中心实验室共享平台50%社区中心ni/w类地区省级CDC集中检测送国家实验室测序重点医院哨点注:I类地区需储备N50
9、00人份检测试剂(2025年佛山疫情经验)总结与展望本方案整合基孔肯雅热防控技术指南(2025年版)及最新实验室技术进展,突出三大核心理念:.精准分型建立“快速筛查一靶向验证T全基因组溯源“三级检测体系I类地区首例病例100%开展E1-A226V突变检测(白纹伊蚊适应性标志).多病共防推广登革热/基孔肯雅热/寨卡病毒联检试剂盒(明德生物等已上市产品)蚊媒标本同步检测CHIKV与登革病毒.智慧监测应用华大智造”测序-分析一体化”平台(CycloneSEQ+DNBSEQ-Tl+)海关入境样本实时测序,实现输入病例“关口前移”执行提示:各实验室应建立检测方法验证制度,新启用试剂需用10份阳性样本验证
10、符合率N90%。2025年7月起,国家疾控中心每月发布毒株遗传进化分析报告,需及时调整引物设计以适应病毒变异。执行提示:各实验室应建立检测方法验证制度,新启用试剂需用10份阳性样本验证符合率290%。2025年7月起,国家疾控中心每月发布毒株遗传进化分析报告,需及时调整引物设计以适应病毒变异。基孔肯雅热详细全面防治措施一、个人层面防治措施1 .防蚊叮咬日常防护:在蚊媒活动频繁时段(日出前后和日落后1-2小时),尽量减少外出,必须外出时,穿长袖浅色衣裤,袖口、裤脚扎紧,裸露皮肤涂抹含避蚊胺(DEET)、派卡瑞丁等成分的驱蚊剂(浓度不低于20%),每4-6小时补涂一次。居家防护:安装合格的纱门、纱
11、窗,定期检查是否有破损,及时修补;夜间睡觉使用蚊帐,蚊帐可浸泡或喷洒长效杀虫剂(如氯菊酯)增强防护效果;使用电蚊拍及时杀灭进入室内的蚊子,每周至少对室内角落进行一次清理,减少蚊子栖息场所。特殊场景防护:前往基孔肯雅热流行地区旅行时,选择配备空调或纱门纱窗的住宿场所,避免在草丛、树荫、积水边等蚊子密集区域长时间停留;露营时,使用驱蚊帐篷或在帐篷周围喷洒杀虫剂。2 .健康监测与就医曾前往流行地区或接触过疑似病例者,在返回后14天内密切关注自身健康状况,每天测量体温,观察是否出现发热、关节疼痛等症状。一旦出现发热(体温238。C)伴关节疼痛,立即佩戴口罩前往就近医疗机构就诊,并主动告知医生旅行史、接
12、触史,配合进行相关检查和治疗,就医途中尽量避免乘坐公共交通工具,减少蚊子叮咬机会。3 .环境清理定期清理自家阳台、院落、屋顶等区域的积水,如清空花盆托盘、倒置闲置的水桶、轮胎,疏通排水沟,确保无积水孳生蚊子,对于无法清空的积水(如鱼缸、储水罐),每周更换一次水,并清洗容器内壁,或投放灭蚊幼剂(如缓释型杀蚊幼颗粒)。二、社区与集体单位防治措施1 .孳生地综合治理公共区域清理:社区物业、居委会组织专人每周对小区内的绿化带、垃圾中转站、下水道、地下室、停车场等公共区域进行排查,清除积水容器(如废弃瓶罐、破旧轮胎、塑料薄膜等),对下水道、排水沟投放灭蚊幼剂,防止蚊子孳生。重点单位防控:学校、幼儿园每日
13、检查操场、花坛、教室角落等,及时清理积水;医院定期对住院部、门诊楼、食堂等区域的积水进行清理,尤其注意医疗废弃物暂存处的环境整治;建筑工地设置专人负责积水清理,对施工积水坑及时填埋或覆盖,使用防蚊网罩住临时积水容器。商业场所管理:农贸市场、超市、餐饮店铺等定期清理摊位周边积水,保持环境整洁,垃圾桶加盖并及时清运,避免污水淤积;户外广告牌、灯箱等下方易积水区域,钻孔排水或定期倒水。2 .成蚊控制定期消杀:在蚊密度较高的季节(5-10月),社区每周组织一次统一的成蚊消杀行动,采用超低容量喷雾器对绿化带、墙角、垃圾桶周边等蚊子栖息场所喷洒杀虫剂(如高效氯氟氟菊酯),喷洒时间选择在清晨或傍晚蚊子活动活
14、跃时段。重点区域强化消杀:在发现疑似病例的居民楼周围50米范围内,连续3天进行强化消杀,每天一次,确保快速降低蚊密度;公共厕所、垃圾站等易滋生蚊子的场所,设置灭蚊灯,并定期更换灭蚊灯内的粘蚊纸或灯管。3 .宣传与监督社区通过公告栏、微信群、居民大会等形式,宣传基孔肯雅热防治知识,发放宣传资料,组织志愿者入户指导居民清理孳生地;建立“楼栋长制”,由楼栋长负责监督本楼栋的积水清理情况,发现问题及时上报社区处理。三、医疗机构防治措施1 .病例发现与报告接诊医生严格按照诊断标准筛查病例,对发热伴关节疼痛且有流行地区旅行史或接触史的患者,立即将其安置在有防蚊设施的隔离诊室,避免蚊子叮咬;采集患者急性期(
15、发病5天内)血清标本,送实验室进行病毒核酸检测,恢复期(发病后2-4周)采集血清标本进行抗体检测。实验室检测阳性后,医疗机构在24小时内完成网络直报,并同时向当地疾控中心提交病例报告卡、流行病学调查资料,确保信息准确完整,对确诊病例的密切接触者进行登记,告知其注意事项并随访14天。2 .患者管理与治疗确诊患者在发病5天内进行隔离治疗,优先安排在单人病房,病房内安装纱门纱窗,配备蚊帐、电蚊拍等防蚊设施,每日对病房及周边环境进行蚊虫消杀;医护人员接触患者时,穿长袖工作服,戴手套、口罩,做好个人防护。严格遵循对症治疗原则,为高热患者制定个体化降温方案,体温超过38.5。C时,先采用温水擦浴、冰袋冷敷
16、等物理降温方法,效果不佳者给予对乙酰氨基酚(成人每次500mg,每6小时一次,每日最大剂量不超过4g),避免使用阿司匹林、布洛芬等可能诱发雷氏综合征或加重出血的药物。对关节疼痛患者,根据疼痛程度分级处理:轻度疼痛者给予休息、抬高患肢、局部冷敷等物理治疗;中度疼痛者口服非笛体抗炎药(如蔡普生,每次250mg,每日2次);重度疼痛且常规药物无效者,在医生指导下短期使用小剂量糖皮质激素(如泼尼松,每日20-3Omg,疗程不超过5天),并密切监测血糖、血压变化。3 .院内感染控制加强医院内蚊媒监测,每周由院感科联合后勤部门对门诊、住院部、食堂等区域进行布雷图指数监测,发现指数25时,立即开展全面消杀;
17、对医院污水处理系统、医疗废物暂存处等重点部位,每3天喷洒一次杀虫剂,防止蚊子孳生和聚集。四、疾控机构专业防控措施1 .监测预警强化病例监测:建立覆盖各级医疗机构的监测网络,每周对网络直报系统中的疑似病例进行审核,对聚集性病例或输入性病例开展流行病学调查,绘制传播链图,追溯感染来源;每月对实验室检测数据进行分析,评估疫情流行趋势,及时发现潜在暴发风险。蚊媒监测:在辖区内按东、西、南、北、中五个方位选取监测点,每个监测点涵盖居民区、公园、医院、学校等不同类型场所,流行季节每10天开展一次蚊密度监测,采用布雷图指数、诱蚊灯法、人诱法等多种方法综合评估,监测数据实时录入信息系统,当布雷图指数。时,发出
18、蚊媒预警。风险评估:结合本地蚊媒密度、输入病例数量、气候条件等因素,每月开展一次基孔肯雅热传播风险评估,划分高、中、低风险区域,针对高风险区域制定专项防控方案,提前部署防控资源。2 .疫情处置规范O输入性病例响应:接到输入性病例报告后,2小时内启动应急响应,疾控人员抵达现场开展调查,确定病例发病前14天的活动轨迹,划定暴露区域(活动场所周围300米范围),对区域内的蚊媒密度进行紧急监测,若布雷图指数N5,立即组织开展孳生地清理和成虫消杀,连续3天,确保蚊密度降至安全水平。本地暴发处置:当出现本地传播病例(即病例无流行地区旅行史且感染来源为本地蚊子叮咬)时,立即划定疫点(病例居住及工作场所周围5
19、00米)和疫区(疫点所在街道或乡镇),在疫区启动应急防控预案,实行交通道口体温监测,暂停大型集会和群体性活动。应急消杀:组建专业消杀队伍,配备车载超低容量喷雾器、热烟雾机等设备,对疫点内的居民楼、绿化带、下水道等进行立体消杀,使用高效杀虫剂(如顺式氯富菊酯)按05-lgm2的剂量喷洒,重点针对蚊子栖息的阴暗角落、植被叶片背面,对疫区范围内的所有积水容器投放灭蚊幼剂,确保覆盖率达100%,连续7天监测蚊密度,直至布雷图指数V5。3 .实验室检测支撑建立省级、市级、县级三级实验室检测网络,省级实验室具备病毒分离、基因测序能力,市级实验室具备核酸检测和抗体检测能力,县级实验室具备快速核酸筛查能力;定
20、期组织实验室人员培训和能力验证,确保检测结果准确可靠。对疑似病例标本,优先采用RT-PCR方法进行病毒核酸检测,检测阳性的标本送省级实验室进行基因分型,分析病毒来源和变异情况,为疫情溯源和防控策略调整提供科学依据。五、政府部门统筹防控措施1 .组织协调与资源调配成立由政府分管领导任组长,卫生健康、疾控、城管、农业农村、教育、交通等部门为成员的防控工作领导小组,每月召开联席会议,通报疫情进展,协调解决防控难点问题;建立跨区域联防联控机制,与周边地区共享疫情信息和防控经验,协同开展边境地区防控。制定防控物资储备清单,包括各类杀虫剂(不少于3个月用量)、蚊媒监测设备(每县区不少于2套)、个人防护用品
21、检测试剂等,由应急管理部门统一储备和调度,确保疫情发生时2小时内可送达现场。2 .环境综合治理城管部门牵头开展城市环境卫生专项整治行动,重点清理城中村、城乡结合部的垃圾死角和积水,对违规堆放的废旧轮胎、塑料容器等进行集中清运和处理;水利部门定期疏通城市排水管网,对河道、湖泊等天然水体进行生态治理,投放食蚊鱼等天敌,减少蚊子孳生。农业农村部门指导农户做好田间地头的积水清理,推广水稻间歇灌溉技术,减少稻田积水时间;对畜禽养殖场的粪污处理设施进行改造,防止污水渗漏形成积水,每月对养殖场周边进行一次蚊密度监测和消杀。3 .宣传教育与社会动员卫生健康部门联合宣传部门制作多语种、多形式的宣传材料(如图文
22、手册、动画视频、方言音频等),通过电视、广播、微信公众号、社区电子屏等渠道广泛传播,重点普及“清积水、防叮咬、早就诊”核心信息,每周发布一期健康提示。教育部门将基孔肯雅热防治知识纳入中小学健康教育课程,每学期开展不少于2次专题讲座或主题班会;工会、妇联等组织面向职工、妇女等群体开展针对性宣传,组织志愿者进社区、进家庭开展入户宣传和孳生地清理指导,提高群众参与度。4 .监督评估与问责政府督查部门联合卫生健康部门定期对各单位防控措施落实情况进行督查,重点检查孳生地清理、蚊媒消杀、病例报告等工作,对未按要求落实的单位下达整改通知书,限期整改,对因防控不力导致疫情扩散的,依法依规追究相关责任人责任。建
23、立防控效果评估体系,从病例数、蚊密度、知识知晓率等指标进行量化评估,每周形成评估报告报送领导小组,根据评估结果动态调整防控策略,确保防控措施科学有效。六、特殊场景与人群防控措施1 .学校与托幼机构开学前对校园进行全面蚊媒消杀,清除绿化带和操场的积水;每日晨检时重点关注学生是否有发热、关节疼痛症状,发现异常立即通知家长带其就医,并对班级环境进行消杀,课间活动时,引导学生在室内或有防蚊设施的区域活动,避免在室外长时间停留。为学生发放防蚊小手册,开展“灭蚊小卫士”活动,鼓励学生参与校园积水清理,培养良好卫生习惯;幼儿园为幼儿配备驱蚊贴,午睡时使用蚊帐,教师定时检查幼儿是否被蚊子叮咬。2 .养老机构与
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