基孔肯雅热实验室检测方案精选样本汇编.docx
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1、基孔肯雅热实验室检测方案一、标本的采集(一)患者标本的采集。急性期血清:发病1周内,无菌静脉采集非抗凝血5ml。恢复期血清:发病后2至3周或以上,无菌静脉采集非抗凝血5mlo(二)伊蚊标本的采集。在本病暴发或流行期间,采集疫点的伊蚊成蚊和幼虫,用于病原学检测。二、标本的保存与运输血液标本采集后,在42条件下尽快运送至实验室进行血清分离并保存。血清标本可置于一2(rc冰箱短期保存,长期保存须置-7(rc以下。标本运输按照卫生部人间传染的病原微生物名录的规定执行。三、检测方法常用检测方法主要有3种:血清学检测、核酸检测和病毒分离。一般情况下,病毒分离与核酸检测宜采用发病后1周内的血清;IgM抗体检
2、测宜采用发病4天后的血清,IgG抗体的检测宜采用发病1周后的血清。(一)血清学检测方法。1 .特异性IgM检测。采用的方法有:捕获ELISA法(MaCELISA)、间接ELISA法、免疫荧光法和免疫层析法等。2 .特异性IgG检测。采用的方法有:间接ELlSA法、免疫荧光法和免疫层析法等。3 .意义IgM阳性结果,表明患者新近CHlKV感染,用于基孔肯雅热早期诊断。IgG阳性结果,表明曾受到CHlKV感染;恢复期血清抗体滴度比急性期抗体滴度有4倍或4倍以上升高则可确诊。(二)病原学检测方法。1 .基孔肯雅病毒核酸检测。一般发病后7日内在多数患者的血清中可检测到病毒核酸。冻存伊蚊标本也可进行基孔
3、肯雅病毒核酸检测。可采用RT-PCR和Real-timeR-PCR等核酸扩增的方法检测。2 .病毒分离鉴定。常用Vero.C636等敏感细胞系开展病毒分离,分离物可以免疫荧光法或核酸检测进行鉴定。3 .意义。患者血清中分离到基孔肯雅热病毒和/或检测到病毒核酸后,可确诊基孔肯雅热病毒感染。基孔肯雅热实验室检测方法基孔肯雅热的实验室检测方法主要有以下几种:病原学检测:核酸检测:一般发病后7天内血液样本病毒核酸检出率较高,常采用实时荧光RT-PCR基于核酸扩增的方法进行检测,可用于早期诊断。对于核酸检测阳性样本可开展病毒基因序列测定和分析,本地传播疫情样本选择应兼顾不同时段、不同地区样本,优先选取首
4、例本地病例样本。病毒培养分离:一般发病后5天内血液样本病毒培养分离率较高,通常将样本接种至哺乳动物细胞(Vero、bhk21)中进行分离与培养,待其出现病变特征后,采用抗原或核酸检测手段鉴定病毒种类。抗原检测:常用双抗体夹心ELISA法或免疫层析法进行抗原检测,一般适用于发病后5天以内血液样本,检出阳性可用于早期诊断。基因组序列分析:采用一代Sanger法或扩增子技术进行病毒E2和El蛋白编码基因序列或全基因组测序,测序技术经质控合格后,方可用于后续生物信息分析。二代测序平台覆盖深度应不低于IOx,三代测序平台覆盖深度应不低于50x,全基因组测序覆盖度应不低于98%o血清学检测:特异性IgM抗
5、体:采用ELISA、免疫层析等方法检测,是辅助诊断基孔肯雅热急性期或近期感染的重要指标。特异性IgG抗体:采用ELlSA、免疫荧光(IFA).免疫层析等方法检测。患者恢复期血清IgG抗体阳转或滴度较急性期呈4倍及以上升高可以确诊。中和抗体:采用空斑减少中和实验、微量中和实验等方法检测,可用于分型。患者恢复期血清中和抗体阳转或滴度较急性期呈4倍及以上升高可以确诊。学校预防基孔肯雅热实施方案近日,天气炎热、雨水增多,蚊子大军又开始倾巢而出,大家需重点防范基孔肯雅热等蚊媒传染病。一、认识基孔肯雅热基孔肯雅热是由基孔肯雅病毒引起的一种急性传染病,主要通过伊蚊叮咬传播,在广东,主要是通过白纹伊蚊(俗称“
6、花斑蚊”)叮咬传播。症状以发热、关节剧痛和皮疹为特征。二、基孔肯雅热的主要症状典型症状包括:突发高热(可达39。C以上);剧烈关节疼痛(常累及多个关节,可导致行动困难,是其显著特征);皮疹(通常在发热后2-5天出现);可能伴有头痛、肌肉痛、恶心、呕吐、乏力等。危害性:虽然大多数患者可痊愈,但关节疼痛可能持续数周甚至数月,影响生活质量。少数患者可能出现严重并发症。目前尚无特效抗病毒药物,治疗以缓解症状为主;也没有上市的有效疫苗进行预防。易感人群:人群普遍易感。在流行区,老人、孕妇、婴幼儿及有基础疾病者是重症高危人群。核心关键:“防蚊灭蚊、清除蚊虫孳生地”是预防基孔肯雅热(和登革热)的最根本、最有
7、效手段!三、成立基孔肯雅热防控工作专班面对严峻形势,可园中学迅速响应,成立了“登革热、基孔肯雅热防控工作专班”,统筹全校力量,采取了一系列强有力的防控措施。四、如何有效预防基孔肯雅热?学校作为人员密集场所,需重点做好防蚊措施。以下是针对校园场景的防蚊指南,帮助学生科学规避蚊媒疾病风险。1 .宿舍防蚊:从源头切断蚊虫孳生宿舍是学生日常活动的核心区域,环境清理是防蚊第一步,积水清零行动:高频检查点:定期清理积水容器,不用的水桶、水盆倒扣放置,阳台角落的积水随时清理,阳台和厕所地漏确保畅通,让蚊子无处产卵;物理屏障搭建:睡前使用蚊帐,夜间安全使用电蚊拍、灭蚊灯等工具;改善居住环境:保持室内外环境整洁
8、垃圾及时清理,做好正确垃圾分类。2 .户外防护:出行场景防叮咬技巧校园内的操场、图书馆、食堂等公共区域及周边绿化带,是蚊虫活跃区,需针对性防护:时间规避:伊蚊在上午79时、傍晚46时活动频繁,尽量避免在此时段长时间逗留树荫、草丛、凉亭等区域;着装建议:外出时穿浅色长袖上衣和长裤,减少皮肤暴露面积、选择透气面料,兼顾防暑与防蚊;驱蚊产品使用:裸露皮肤涂抹含避蚊胺、派卡瑞丁等成分的驱蚊剂,让蚊子无从下口;在蚊虫密集区域,可使用蚊香、电蚊拍等工具辅助灭蚊。3 .加强健康监测和健康管理全校师生员工需继续加强自我健康监测,前往境外或佛山等地旅行或探亲的师生员工,要提前了解目的地的疫情情况,出现基孔肯雅
9、热和登革热疑似症状(突起发热、皮疹、肌肉骨骼关节痛等等),应及时到正规医院就诊。突发高热+关节痛/皮疹,尤其有基孔肯雅热流行地区旅居史或蚊虫叮咬史,立即就诊并主动告知医生相关暴露史。4 .持续加强环境整治师生员工要持续做好环境卫生清理整治和积水清理等工作,定期对住所开展灭杀成蚊工作,灭杀时注意用药、用电、用火安全。住宿学生每周灭蚊不少于两次,如需灭蚊片,可到楼下宿管值班岗处领取(在室内燃点灭蚊片时要特别注意防火安全)。温馨提示:预防基孔肯雅热核心战术:防蚊!灭蚊!做好个人防护,避免病毒传给家人或朋友。基孔肯雅热防控知识一、病原学特征基孔肯雅病毒对热敏感,56C30分钟可灭活;不耐酸,70%乙醇
10、1%次氯酸钠、脂溶剂、过氧乙酸、甲醛、戊二醛、酚类、碘伏和季镂盐化合物等消毒剂及紫外照射可灭活。二、流行病学特征(一)传染源患者、隐性感染者、带病毒的非人灵长类动物。(二)传播途径主要通过携带基孔肯雅病毒的伊蚊叮咬传播,在我国传播媒介主要为白纹伊蚊和埃及伊蚊。伊蚊在叮咬病毒血症期的人或动物后,病毒在蚊虫体内繁殖并到达唾液腺内增殖,经2至10天的外潜伏期再传播。罕见情况下,可发生经输血或接触患者血液导致传播和母婴传播。(三)潜伏期一般为112天,多为37天。(四)传染期大多数患者在发病当天至发病后7天内具有传染性。(五)易感人群人群普遍易感。人感染病毒后可获得持久免疫力。(六)流行特征1952
11、年在坦桑尼亚首次发现基孔肯雅病毒,主要流行于非洲地区,之后不断扩展到东南亚、南亚、印度洋岛屿及美洲地区。截至2025年6月,全球已有119个国家和地区报告了基孔肯雅热的本地传播,主要发生在美洲、亚洲和非洲,累及地区与登革热、寨卡病毒病相近。在我国,基孔肯雅热尚未形成地方性流行,但白纹伊蚊分布范围广泛,适合病毒快速传播的蚊媒活跃期长,面临病毒血症期输入性病例引起的局部传播风险。2008年我国首次发现输入性病例,2010年后相继报告了6起输入引发的本地疫情。7H月为我国报告病例高峰期。(七)临床特征基孔肯雅热患者的临床特征是突然发热,经常伴有严重关节痛和皮疹,极少数患者可出现出血、脑炎、脊髓炎等严
12、重并发症,甚至导致死亡。常见临床表现如下:L发热:急起发热,体温可达39。C以上,一般发热1天7天。部分病人热退后再次出现发热,表现为双峰热,持续3天5天恢复正常。常伴有寒战、头痛、背痛、全身肌肉疼痛、畏光、恶心、呕吐等症状。2 .关节疼痛:关节疼痛主要累及手腕和踝趾等小关节,也可涉及膝和肩等大关节,腕关节受压引起剧烈疼痛是本病的重要特征。急性期多个关节出现疼痛或关节炎表现,可有肿胀或僵硬,晨间较重,严重者不能活动,通常1周3周缓解。部分病例关节疼痛可持续数月甚至数年。3 .皮疹:发病后2天5天,半数以上病例在躯干、四肢伸侧、手掌和足底出现红色斑丘疹或紫瘢,疹间皮肤多为正常,部分伴有瘙痒感,数
13、天后消退,可伴脱屑。三、流行风险地区分类贯彻多病同防策略,综合考虑媒介伊蚊地域分布和活跃期长短,参照登革热防控方案(2025年版),将31个省(自治区、直辖市)及新疆生产建设兵团的流行风险由高到低分为I类、II类、III类、IV类地区。后续可视传播风险变化动态调整。I类地区(6个):指媒介伊蚊活跃期较长、既往报告登革热本地病例较多、聚集性疫情发生风险相对较高的省份,包括浙江、福建、广东、广西、海南、云南。II类地区(11个):指媒介伊蚊活跃期相对较长或既往有登革热本地病例报告、有一定聚集性疫情发生风险的省份,包括上海、江苏、安徽、江西、山东、河南、湖北、湖南、重庆、四川、贵州。III类地区(8
14、个):指有媒介伊蚊分布、既往未报告过登革热本地病例,但存在输入病例引起本地传播风险的省份,包括北京、天津、河北、山西、辽宁、西藏、陕西、甘肃。IV类地区(7个):指目前未监测到媒介伊蚊分布、既往未报告过登革热本地病例的地区,包括内蒙古、吉林、黑龙江、青海、宁夏、新疆及新疆生产建设兵团。四、疫情处置(一)科学划定风险区域基孔肯雅热流行季节出现确诊病例(包括输入病例、本地病例)的I类、II类、m类地区,以及基孔肯雅热非流行季出现本地病例的地区,应根据个案流行病学调查结果,科学划分核心区、警戒区和监控区3个风险区,落实防控措施,防止疫情传播扩散。划分原则参考登革热防控方案(2025年版)。(二)分级
15、分类处置疫情遵循“早、小、严、实”原则,分级分类处置疫情。1 .输入疫情。采取“媒介应急控制,做好病例救治和防蚊隔离管理”的防控策略,防止引发本地疫情。非流行季出现输入疫情时,各地要做好病例救治和防蚊隔离工作。流行季出现输入疫情时,在病例救治和管理基础上,I类、II类和m类地区防控重点是查明患者病毒血症期(发病起7天内)的活动地点,划分风险区域,开展成蚊杀灭工作。共同暴露者做好12天自我健康监测。2 .本地疫情。采取“1天内完成风险区域划定并启动灭蚊工作,核心区3天内完成入户调查处置、3天内完成全覆盖成蚊杀灭、5天内控制蚊媒密度”的防控策略,做到发现一起、扑灭一起,严防疫情升级和外溢扩散J类、
16、II类和III类地区要快速划定核心区,核心区和警戒区全面落实逢热必检,强化病例搜索和防蚊隔离管理,严格落实媒介应急控制措施。若疫情升级为局部暴发,要避免医疗挤兑,优先保证重症患者,孕妇、老年人及新生儿等重症高风险人群住院,I类地区发生疫情的街道或乡镇要积极开展爱国卫生运动,发动单位和群众,做好蚊媒孳生地清理和成蚊杀灭。(三)媒介伊蚊应急控制与监测媒介伊蚊活跃期出现基孔肯雅热确诊病例时,I类、II类、IIl类地区开展媒介伊蚊应急监测与控制。1 .媒介伊蚊应急控制。核心区应在3天内将成蚊密度控制在安全水平(如双层叠帐法低于0.9只/(顶小时),在5天内将布雷图指数降至5以下;警戒区应在7天内将布雷
17、图指数控制在5以下。超低容量喷雾是杀灭成蚊首选控制措施,要求雾滴大小为10-20微米,每天可多次喷雾;滞留喷洒可用于重点场所,2周喷雾一次;热烟雾机主要用于植物茂密的区域。2 .媒介伊蚊应急监测。采用布雷图指数法开展伊蚊幼虫监测,采用双层叠帐法开展伊蚊成蚊监测。鼓励各地结合本地特点采用诱蚊诱卵器、化学引诱剂以及其他新技术新方法开展监测。核心区每天开展监测,媒介伊蚊密度达到安全水平(如双层叠帐法低于0.9只/(小时)后每周开展2次监测,直至疫情结束。警戒区每周开展1次监测,监控区每两周开展1次监测,直至媒介伊蚊密度达到安全水平。核心区的应急监测,每次监测应不少于5个监测点。持续出现病例的疫点,伊
18、蚊密度控制要有更严格的要求。(四)疫情通报各级疾控部门应依法及时发布基孔肯雅热疫情信息,科学发布健康风险提示。出现省内跨区域疫情传播时,涉及地区的疾控部门和相关机构要加强信息互通共享,尽早采取防控措施。出现跨省份疫情传播时,病例输入省份的疾控部门应及时将相关信息通报病例输出省份的疾控部门,共同做好疫情调查处置。(五)疫情终止条件当划定的核心区、警戒区连续22天内无续发本地病例,且核心区内布雷图指数降至5以下,双层叠帐法成蚊密度不高于0.9只/(小时),可终止核心区、警戒区伊蚊应急监测与控制工作。五、预防措施(一)开展爱国卫生运动,全面清除蚊虫孳生地存在流行风险的地区应积极做好爱国卫生运动,常态
19、化及时清除蚊虫孳生地,降低蚊媒密度。强化城市背街小巷、城中村、城乡结合部、建筑工地、公园、景点、花卉市场、农贸市场等重点场所卫生治理,整治农村地区房前屋后垃圾,全面清理河塘、沟渠,最大限度消除卫生死角,减少病媒生物孳生地。(二)加强卫生宣教,普及预防知识1 .指导群众防蚊灭蚊。在有基孔肯雅热流行风险的地区,要采取多种有效形式,以通俗易懂的方式开展健康教育活动,使群众了解本病传播的途径、主要危害和伊蚊媒介孳生特点以及防止蚊虫叮咬的知识和技能。引导群众配合社区做好入户防蚊灭蚊等工作,主动使用蚊香、驱避剂、蚊帐等方式驱蚊、灭蚊和防蚊,当好自身健康第一责任人。2 .提示旅行者预防境外感染。各地卫生机构
20、协助旅游部门做好前往基孔肯雅热流行区的旅行者及导游的宣传教育,尤其是前往东南亚、南亚、非洲和南美洲流行区的旅行者,提高防范意识,防止在境外感染基孔肯雅热。归来后2周内,落实好自我防蚊叮咬措施,一旦出现可疑症状,应主动就诊并将旅行史告知医生。相关内容见基孔肯雅热科普核心信息。(三)强化医务人员培训,提高疾病识别能力开展医务人员诊疗知识培训,提高疾病诊断与识别能力。重点地区应在每年流行季节前开展一次基层医务人员基孔肯雅热相关知识的强化培训L增强对基孔肯雅热的认识,及时发现和报告疑似基孔肯雅热病例。(四)加强媒介伊蚊密度监测,落实灭蚊措施疾控部门应开展以社区为基础的蚊媒密度监测或调查,包括伊蚊种类、
21、密度、季节消长等;发现蚊媒密度偏高时,及时提请相关单位开展清除蚊虫孳生地及预防性灭蚊工作。(五)加强信息沟通,做好联防联控疾控部门与海关、旅游、住建、教育、商务、商会等部门建立联防机制,及时通报信息,联合开展风险评估和协调疫情处置工作。2025年基孔肯雅热实验室检测方案一、检测对象与适用场景1 .疑似病例发热(38。C)伴急性关节痛/关节炎,且发病前14天内有疫区旅居史或蚊虫叮咬史。无典型关节痛症状的儿童或老年人,但出现发热、皮疹等非特异性症状。2 .聚集性疫情同一社区/单位短期内出现N2例发热伴关节痛病例,需启动应急检测。3 .入境筛查来自东南亚、非洲、南美等流行区的发热旅客。二、样本采集与
22、处理样本类型采集时间窗处理要求血清/血浆发病后1周内(急性期)4。C保存,24小时内送检;-70。C长期冻存全血发病后5天内(病毒血症期)EDTA抗凝,避免溶血恢复期血清发病后2-4周与急性期血清配对检测,确诊抗体转化注意:样本运输需符合生物安全三级包装标准,避免反复冻融。三、核心检测方法及流程(一)病原学检测1 .核酸检测(RFPCR)适用期:发病后1周内(病毒血症期)。O靶基因:EhnsPl等保守区基因,引物设计参考WHO推荐序歹上。阳性判定:检出特异性片段且Ct值335。2 .病毒分离适用Veto、C6/36细胞系,需BSL-3实验室操作。(二)血清学检测LIgM抗体检测窗口期:发病后5
23、天至3个月,阳性提示近期感染。假阳性处理:需经中和抗体试验确认(如PRNT)。2.1 gG抗体检测恢复期血清IgG滴度较急性期升高倍可确诊。优先策略:急性期首选核酸检测,发病5天后补充IgM检测。四、结果解读与报告检测结果临床意义行动建议核酸阳性/IgM阳性确诊感染立即上报并启动防蚊隔离核酸阴性+IgM阴性排除感染或窗口期未检出恢复期血清复测IgG单阳性(无急性期样本)提示既往感染结合流行病学史评估五、质量控制与生物安全1 .质控要求每批次检测需包含阴性对照、阳性对照(灭活病毒或合成核酸)。商业化试剂需具备国家农药登记证号(驱蚊产品同理)。2 .生物安全病毒分离在BSL-3实验室进行,血清检测
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