具有不对称膜囊泡用于高效多肽药物的释放分析研究 功能材料专业.docx

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1、目录摘要11 .前言21.1 引言21.2 聚合物囊泡的组成31.3 聚合物囊泡的制备方法和载药机理41.4 课题提出42 .实验部分52.1 材料与试剂52.2 仪器与表征62.3 聚合物囊泡包载LTX-315(PS-LTX-315)制备条件的筛选62.3.1 制备纳米粒与静置交联时的转速筛选62.3.2 溶液PH的筛选62.3.3 理论载药量的筛选72.3.4 纳米粒在FBS条件下的稳定性和稀释稳定性(纳米粒浓度是20ugml)以及GSH条件下的响应性72.3.5 A6修饰包载LTX-315囊泡（A6-PS-LTX-315）的制备82.4 细胞毒性实验（MTT实验）83 .结果与讨论83.

2、1 聚合物囊泡包载多肽药LTX-315的制备条件的筛选93.1.1 制备纳米粒以及摇床中静置交联转速的筛选93.1.2 溶液PH的筛选113.1.3 理论载药量的筛选143.1.4 纳米粒在FBS条件下的稳定性和稀释稳定性（纳米粒浓度是20ugml）以及GSH条件下的响应性153.1.5 A6修饰的载LTX-315的囊泡（A6-PS-LTX-315）的制备173.2A6-PS-LTX-315的细胞毒性实验（MTT实验）184 .结论19参考文献21致谢错误!未定义书签。具有不对称膜囊泡用于高效装载多肽药物摘要生物药物相比化疗药物具有更低的毒副作用和广阔的发展前景。但这类药物容易被蛋白酶降解，生

3、物利用率降低，肿瘤的穿透能力也差，使其发展受到阻碍。为了解决这个问题，我们基于实验室所特有的DTC平台技术，设计了具有不对称膜结构的囊泡mPEG-P(TMC-co-DTC)-KD10,该囊泡亲水内膜由带负电的天冬氨酸组成。通过溶液置换法制备得到载阳离子抗菌肽LTX-315的囊泡。为了增强纳米囊泡的肿瘤特异性，我们在PEG的末端修饰了靶向配体A6,从而形成高效装载多肽药物的自交联稳定的靶向囊泡。本文研究了溶液pH、搅拌转速、理论载药量以及靶向聚合物配比等条件对药物包载的影响，针对多肽药物的载药量、囊泡粒径及其分布情况筛选出最佳条件。止匕外，MTT实验结果表明，A6修饰的载药囊泡比无靶向囊泡在杀死

4、B16F10黑色素瘤细胞上表现出更优异的杀伤效果。关键词：不对称膜囊泡；阳离子抗菌肽；LTX-315；细胞毒性AbstractBiologicaldrugsareadvantageouscomparedtochemodrugsowingtotheirlowsideeffectsandhighspecificity,showinghighpotentialforcancertherapy.However,thesedrugscanbeeasilydegradedbyenzymesinvivo,havepoorpenetrationabilityandlowbioavailability,whic

5、hhindertheirfurtherdevelopment.Inordertosolvetheproblems,basedonDTCtechnologyplatformwedesignedandSynthetizedchimaericpolymersomesfromcopolymerPEG-P(TMC-co-DTC)-KD10,inwhichnegativelychargedpolyasparticacidformstheinnershell.Duringtheformationofpolymersomes,cationicantimicrobialpeptideLTX-315wasenca

6、psulatedinsidethepolymersomes.Toenhancetumorspecificity,tumortargetingligandA6peptidewasanchoredonthepolymersomesurfacetoformLTX-315loaded,self-crosslinkedstablepolymersomes.Inthisthesis,theeffectofpH,agitationspeed,drugloadinginfeedandtargetingpolymercontentonthefinaldrugloadingcontent(DLC)wasstudi

7、ed.ThebestconditionswerescreenedoutforDLC,sizeanddistributionofpolymersomes.Inaddition,MTTassayresultsdisplayedthatA6modifiedLTX-315loadedpolymersomesshowedsuperiorcytotoxicityonB16F10melanomacellstonon-targetedpolymersomes.Keywords:Chimearicpolymersomes,Cationicantimicrobialpeptide,LTX-315,Cytotoxi

8、city1 .前言1.1 引言近年来,恶性肿瘤对人类的威胁日趋严峻,对社会经济也产生巨大的影响。手术、放疗与化疗是现阶段临床上治疗癌症的主要方法。化疗药物虽应用广泛，能有效抑制肿瘤细胞的生长，却无法选择性识别肿瘤细胞与正常细胞，产生较强的毒副作用。此外，在治疗过程中肿瘤细胞产生耐药性，也会大大限制了化疗药物在癌症治疗中的作用。相比于传统的化疗药物，生物药物如蛋白质、核酸、多肽药物等因其具有更低的毒副作用等优点，受到研究者的青睐，多肽药物与其他的生物药相比，其结构简单,合成技术简便。目前研究发现，许多生物阳离子活性肽(ACPS)具有抗癌活性，它们通过静电作用与癌细胞膜相互作用或通过与细胞内靶的相

9、互作用杀死癌细胞。在这些生物活性肽中，LTX-315(CKKWWKKW(DiP)K-NH2)一种9肽阳离子溶瘤肽表现出良好的抗癌活性和肿瘤治疗能力，它可以刺激抗癌免疫应答，逆转癌细胞的耐药性。它有潜力作为一种新型的抗癌药物，而且目前正在处于临床的I期11期研究。然而多肽药物在体内很容易被生物蛋白酶降解，生物利用率比较低，肿瘤的穿透能力也比较差。为了克服这些缺点，使多肽药物得到更好的应用，纳米药物载体的优越性能受到越来越多的关注与研究o纳米药物载体包括聚合物胶束、脂质体、纳米凝胶、聚合物囊泡等。这些纳米药物载体的粒径通常在20-200nm,这使得它们可以利用EPR效应，有效地将抗癌药物定向输送到

10、癌症细胞。抗癌药物因此被动地富集在肿瘤组织中，并大大减小了毒副作用，降低对正常细胞的伤害。迄今为止，12种纳米药物已经在临床中投入使用，止匕外有1000多种纳米药物也正处于临床试验的不同阶段。二十世纪后期，AdiEisenberg和DennisDischer教授研究并提出了聚合物囊泡的结构，引发了人们对聚合物囊泡进行了大量研究。尤其是它作为纳米药物载体的巨大潜力，正受到越来越多的关注。聚合物囊泡由两亲性聚合物在水溶液中自组装形成，较于脂质体拥有更好的稳定性和机械性能，其亲水内腔适用于包裹各种亲水性药物。止匕外，聚合物的多样性赋予了囊泡结构不同的性能，例如生物可降解性、刺激响应性以及体内循环稳定

11、性等口叫在囊泡表面修饰上肿瘤细胞特异性的靶向分子，可以使其在体内循环时，通过配体-受体介导进入靶向部位，于肿瘤组织中特异性聚集并释放抗癌药物，从而达到靶向治疗的目的，减小对正常器官的伤害。目前，全球范围的研究者们已经在聚合物囊泡应用于纳米药物方面取得了丰硕的成果，针对不同的需求，开发出了刺激响应性囊泡、肿瘤主动靶向囊泡、循环稳定的囊泡、生物可降解囊泡、具有不对称膜型囊泡等众多功能性囊泡，为囊泡纳米药物的临床发展奠定了基础。1.2 聚合物囊泡的组成结合LTX-315的亲水性和带正电的性质，我们选取了聚合物囊泡作为这次毕业设计所用的纳米载体。聚合物囊泡是由两亲性的聚合物在水溶液中自组装而成的纳米粒

12、子，它具有可以包裹疏水药物的疏水的双分子膜层，和可以包载亲水药物的内腔。调节聚合物亲疏水链段的比例可形成不同结构的自组装体,例如薄层结构、棒型胶束、球型胶束、管型囊泡和球型囊泡等。通常情况下，当聚合物亲水段占总分子量的20%40%时，聚合物倾向于自组装形成囊泡结构。不对称膜囊泡区别于一般的囊泡结构，它的内外壳由不同的两亲性聚合物组成,较长的亲水链倾向于排列在囊泡的外壳,而较短的亲水链倾向于排列在囊泡的内壳。利用这种特殊结构，我们可以控制聚合物性质和分子量来提高囊泡的载药能力。在本论文中，基于我们课题组特有的DTC平台技术载体，我们选用了内膜由天冬氨酸修饰的聚合物载体来自组装成一种不对称膜囊泡，

13、利用它带负电的性质包载LTX-315。1.3 聚合物囊泡的制备方法和载药机理实验室制备聚合物囊泡的主要方法有溶剂置换法、溶剂挥发法、电形成法、薄膜水化法和直接溶解法口”而最常用的方法是溶液置换法：先将聚合物溶于良溶剂中，例如DMF、DMSO；然后将聚合物溶液加入水相中，使两亲性的聚合物自发地组装成囊泡；最后利用透析等方法将溶解聚合物的溶剂和未包载进囊泡中的自由药除去。聚合物囊泡载药方法的选择需要结合聚合物的性质，所包载的药物的性质以及溶剂等外在条件。当囊泡包载疏水药物时，一般会利用疏水膜通过疏水相互作用将药物进行包载，例如我们课题组报道过的PEG-P(DTC-CL)聚合物包载紫杉醇。而囊泡包载

14、亲水药物时，主要利用离子梯度法或静电作用等。多肽药物或带有痰基或氨基的小分子抗癌药物可以利用静电或氢键作用包载在囊泡中。而不对称膜囊泡结构对这类药物的包载效果具有优异的特点，它不仅仅能提高这类药物的载药量，还能保护药物免被机体过早清除H1我们课题组曾报道过这类囊泡Peg-P(TMC-DTC)-PEI对培美曲塞二钠(PEM)高效包载并产生了优异的抗肿瘤活性。1.4 课题提出聚合物囊泡因其可控的聚合物性质与分子量，能产生更厚的疏水膜，可稳定地装载亲水或疏水药物，延长体内循环时间，在肿瘤药物的控制释放上具有巨大的潜力。但在实际应用时，囊泡的细胞选择性差、包载率低、聚合物的生物不可降解以及囊泡在人体血

15、液循环中的不稳定等问题限制了囊泡纳米药物进入临床试验。因此，制备更为优质稳定的囊泡是本次设计的目标。我们选取聚合物mPEG-P(TMC-Co-DTC)-KDlo来制备囊泡，在囊泡结构中，PEG链段位于囊泡的外表面，凭借其链柔顺性、优异的生物可适性以及细胞和蛋白不易吸附等特点，大大延长了囊泡在生命体内循环的时间。而在完全可生物降解的疏水段PTMC中引入含有二硫戊环的DTC,可使得聚合物载体自交联形成稳定囊泡并保持其在血液循环中的稳定性，在到达肿瘤部位后在肿瘤细胞内GSH作用下能够快速响应并释放药物。最后由有天冬氨酸修饰的内膜具有负电的载体可以通过静电作用与带有正电的LTX-315多肽药很好地作用

16、在一起，稳定地对这种阳离子活性肽进行包载。2 .实验部分2.1 材料与试剂所用聚合物mPEG-P(TMC-ra-DTC)-KD10,A6-PEG-P(TMC-co-DTC)由周程师兄提供；LTX-315(98.49%,强耀生物)；谷胱甘肽(GSH,99%,Roche)；N-2羟乙基哌嗪-N-2-乙磺酸(99%,阿拉丁)；以下试剂均从上海国药有限公司购买后直接使用：二甲亚碉(DMSO),N9N-X甲基甲酰胺(DMF),二水合磷酸二氢钠(NaH2PO4IH2O),十二水合磷酸氢二钠(Na2HPO4i2H2O),氢氧化钠(NaOH),透析袋(MWeo:3500Da,Spectrum),3-(4,5-

17、二甲基曝噗-2)-2,5-二苯基四氮噗澳盐(MTT,Sigma)o2.2 仪器与表征囊泡粒径和粒径分布通过ZetasizerNano-ZS动态光散射仪(英国Malvern公司)测定，温度为25,采用He/Ne激光光源和背折射检测器，波长为633nm。聚合物囊泡的包封率和载药量由UH5300双光束分光光度计(日本HrrACHl公司)进行测定,使用紫外检测器。美国ScientificIndustries生产的多用途旋涡混合器Vortex-Genie2,可调速度控制，能从低速振动到高速旋涡混合，将药品混合均匀。2.3 聚合物囊泡包载LTX-315(PSLTX315)制备条件的筛选2.3.1 制备纳米

18、粒与静置交联时的转速筛选将两份100L的mPEG-P(TMC-ra-DTC)-KD10聚合物的DMSO溶液(IomgmL)在37水浴下分别加入到静置和转速250rpm搅拌下的900L的Hepes溶液中(10mM,pH6.8),然后将其放置在OrPnb37C的摇床中静置孵育一天。同时，将相同条件制备的两种不同转速的纳米粒放入20OrPm,37的摇床中孵育一天。次日用DLS观察囊泡形成情况后将囊泡溶液放入透析袋(MWCO:3500Da)在Hepes缓冲溶液(10mM,pH7.4)中透析6h,每Ih换一次透析介质，即得聚合物囊泡，再对其进行一次DLS测试。232溶液PH的筛选配制不同的Hepes缓冲

19、溶液，用2M的NaOH溶液调节pH,分别得到PH分别为5.3,6.4与6.8的溶液。在37水浴中，将100L聚合物溶液缓缓注入900LPH5.3的Hepes缓冲溶液，并按照同样的方法在PH6.4与6.8的溶液中操作。在水浴37条件下，将17.5LLTX-315的水溶液（5mgmL）注入900LpH为5.3的Hepes溶液中，搅拌三分钟后再将100L聚合物溶液缓缓注入，完成载药，并按照同样的操作，完成PH6.4与6.8条件下的载药。将上述的六个样品用DLS测试观察后放入OrPnb37摇床静止一天。次日透析处理后再进行一次DLS测试，观察得到的囊泡。配置20,40,60,80,100和120mg/

20、mL的多肽药溶液，以水作为背景，用紫外分光光度计测得标曲。然后以制备的聚合物囊泡空壳作为背景，对载药的样品进行测试，从而计算得到实际的包封率和载药量。2.3.3 理论载药量的筛选分别取10.5L22.2L以及35.2L的LTX-315（5mg/mL）溶液按照之前的方法，在pH6.8的Hepes溶液中制备纳米粒，得到理论载药量分别为5%,10%与15%的囊泡，在透析前后进行DLS测试，透析完成后进行紫外的测试得到实际的包封率和载药量。2.3.4 纳米粒在FBS条件下的稳定性和稀释稳定性（纳米粒浓度是20ugml）以及GSH条件下的响应性将900L透析后的15%载药量的PS-LTX-315囊泡中加

21、入100LFBS,混合均匀后在200rpm,37的摇床中放置24h,次日对其进行DLS测试。另取20L透析后15%载药量的PS-LTX-315囊泡加入980LHepes缓冲溶液使囊泡稀释至20gmL,静置半小时后进行DLS测试。最后在N2保护下在1mL15%载药量的PS-LTX-315囊泡中加入3.04mgGSH,溶解后在37摇床中静置12h后DLS测试。另外，测试时需要一组15%载药量透析后的PS-LTX-315囊泡作为对照组。235A6修饰包载LTX315囊泡(A6PSLTX315)的制备A6-PS-LTX-315通过静电吸附法制备。简要概述为，将100L(10mgmL)按照预定比例(3/

22、7,mol/mol)混合的A6-PEG-P(TMC-co-DTC)和PEG-P(TMC-co-DTC)-KDlO的DMSO溶液,匀速的加入到含有LTX-315多肽药的Hepes缓冲溶液(IomM,pH6.8)中形成囊泡。孵育20h后，在HePeS缓冲溶剂中透析以除去有机溶剂和游离药物，即为载药交联囊泡XA6-PS-LTX-315,X表示混合聚合物中A6-PEG-P(TMC-co-DTC)的摩尔分数，无A6的非靶向囊泡为PS-LTX-315o2.4 细胞毒性实验(MTT实验)将80L的B16F10细胞悬浮液以2xl()3孔的密度铺于96孔板中孵育24h,加入设定浓度的30%A6-PS-LTX-3

23、15和PS-LTX-315(最终孔内LTX-315浓度为0.1-80gmL)o在培养箱连续孵育60h后，每孔加入10L的MTT溶液(5mg/mL)。培养4h后，吸走培养基，加入150L的DMSO将活细胞与MTT作用形成的紫色甲瓒结晶溶解。然后通过酶标仪测得每孔在570nm处的紫外吸光度值。每组设置5个复孔。细胞存活率是比较各孔在570nm处的紫外吸光度和只用PBS处理的对照细胞的570nm的吸光度而得到。3 .结果与讨论3.3 聚合物囊泡包载多肽药LTX-315的制备条件的筛选本次毕业设计我们选用了聚合物mPEG-P(TMC-co-DTC)-KD10,以水溶性的阳离子多肽药物LTX-315为模

24、型药物，通过溶液置换法制备了包载LTX-315的不对称膜囊泡，系统地研究了搅拌、溶液pH、靶向聚合物配比、理论载药量等参数对囊泡的影响并以纳米载体的粒径及其分布、稳定性、载药量为标准筛选制备纳米药物载体的最佳条件。3.1.1 制备纳米粒以及摇床中静置交联转速的筛选在水浴37中，聚合物mPEG-P(TMC-co-DTC)-KD10初始浓度10mgml,在静止和搅拌条件下制备出囊泡空壳并在不同转速摇床中静置交联24h,并对透析前后的纳米粒粒径和分布进行DLS测试。表1纳米粒在不同转速条件下囊泡的粒径及分布投料比(%)搅拌速度(rpm)摇床速度SizeSize(d.nm)PDI(d.nm)PDI(r

25、pm)缓冲溶液PH透析前透析后0006.432.80.0932.80.15025006.428.30.0828.30.14002006.433.10.1031.00.10图1不同转速条件下透析前囊泡的粒径分布图20505(mjudwi0rpm透析200FPm透析250rpm透析Size(nm)101001000图2不同转速条件下透析后的囊泡粒径分布图由上述数据分析可得，不同条件下得到的纳米粒较为接近。但在静置条件下制备囊泡可获得相对更大的粒径，这可能更有利于后续包载更多的多肽药物。因此，在后续的实验操作中，我们选取0rpm作为制备纳米粒的搅拌转速及摇床中静置交联转速。3.1.2 溶液pH的筛选

26、在37水浴条件下，聚合物初始浓度IOmgmL,理论载药量8%,制备出缓冲溶液PH为5.3,6.4以及6.8的囊泡空壳和载药纳米粒，在透析前后对其粒径和分布进行DLS测试。表2不同PH条件下囊泡空壳及载药的粒径及其分布投料比(%)缓冲溶液PHSizePDI(dnm)透析前Size(dnm)透析后PDI05.330.20.1931.60.1606.433.50.1734.30.2506.833.50.0933.70.1385.328.40.0740.00.3186.432.30.1239.50.3786.832.70.0928.30.12(MJu(WI图3不同PH的缓冲溶液中制备的囊泡粒径分布图S

27、ize(nm)()SU2Size(nm)(M=SUSU一图5不同PH的缓冲溶液中囊泡载药后的粒径分布图(mesuse图6不同PH条件下囊泡载药透析后的粒径分布图由表格中的数据可知，无论是空壳还是载药的囊泡，PH为6.8的纳米粒在粒径分布上的表现都优于另外两者。尤其是载药的囊泡中，PH为5.3和6.4的纳米粒在透析后PDl变化极大，通过分布曲线可发现，这两个样品中的囊泡在透析后发生了团聚，这是我们所不希望看到的。因此，在后续的实验中，我们选取PH为6.8的Hepes缓冲溶液作为水相环境来制备纳米粒子。3.1.3 理论载药量的筛选在37水浴及PH6.8的Hepes缓冲溶液中，制备理论载药量分别为0

28、5%、10%以及15%的囊泡在透析前后进行DLS测试，透析完成后进行紫外的测试得到实际的包封率和载药量。表3不同载药量的囊泡透析前后的粒径及其包封率Size(dnm)PDISize(dnm)透析PDI后包封率（）投料比（）透析前029.50.0927.90.030529.10.1028.20.1397.51032.00.1029.50.1095.11535.00.1633.30.1692.625()SU(DWIALLII1Il1101001000Size(nm)图7不同载药量的囊泡在透析之前的粒径分布图图8不同载药量囊泡在透析后的粒径分布图从包封率测试可知，15%的理论载药量是可以达到的。

29、此外，根据纳米粒的粒径和分布来看，15%载药量的囊泡粒径远大于5%和10%,虽然在200Onm处有吸收，但比例相对而言较小。囊泡粒径随载药量从0%到15%不断增大，10%的囊泡载药量远未饱和。当尝试进行20%载药量的实验时，囊泡则直接发生了团聚。以上说明我们选取的聚合物mPEG-P(TMC-co-DTC)-KD10可以用来制备15%载药量的囊泡，且15%的载药量接近于理论上的最大值。3.1.4 纳米粒在FBS条件下的稳定性和稀释稳定性(纳米粒浓度是20ugml)以及GSH条件下的响应性分别制备含10%FBS,10mM/mLGSH和缓冲溶液稀释50倍的PS-LTX-315,并用DLS测试观察纳米

30、粒。将结果与PS-LTX-315的对照组相比，得到纳米粒的稳定性和响应性结论。821图9纳米粒在FBS条件下的稳定性和稀释稳定性(M)APUaPII1111Size(dnn)18图IO纳米粒在GSH条件下的响应性从图中我们可以知道，在10%的FBS条件下，纳米粒可以稳定的存在，IOnm左右的粒子应该是FBS里的蛋白质。纳米粒用PB稀释50倍后(浓度是20ugml)也能稳定存在，加入IOmM谷胱甘肽GSH模拟细胞内环境下，GSH触发了DTC中二硫键断裂，囊泡发生了解交联。3L5A6修饰的载LTX315的囊泡(A6PSLTX315)的制备在37水浴条件下将100L(IOmgZmL)按照预定比例(3

31、0：70)混合的A6-PEG-P(TMC-DTC)和PeG-P(TMC-DTC)-KD10的DMSO溶液滴加至含有LTX-315多肽药的HePeS缓冲溶液(pH6.8)中形成囊泡。在透析前后进行DLS测试，并在透析后用紫外分析测得其包封率。表4A6修饰囊泡的粒径及包封率的对比SizePDISizePDI样品(dnm)(dnm)透析前透析后包封率()0%A615%31535.00.1633.30.1692.630%A615%31549.20.1244.20.1464.720()xsu区UI图9A6聚合物修饰囊泡透析前后的粒径分布图经A6修饰的A6-PS-LTX-315囊泡相比于无A6的囊泡能产生

32、粒径更大囊泡结构，在粒径的分布上也表现的更加优异。虽然缺少了30%的PEg-P（TMC-DTC）-KDlo包载LTX-315,但64.7%的包封率也还算是差强人意。除此之外，44.2nm左右的粒径也有助于囊泡拥有更大的亲水内腔进行药物包载。3.2 A6-PS-LTX-315的细胞毒性实验（MTT实验）经过MTT实验，我们探究了A6-PS-LTX-315和PS-LTX-315对B16F10的毒性以及靶向性的抗癌效果。通过测定不同浓度下A6-PS-LTX-315对B16F10细胞的毒性，从而绘制曲线拟合计算出其半致死的浓度（IC50）为11.0gmL,远低于PS-LTX-315组的半致死浓度43.

33、4gmL因此可以得到结论，我们制备的A6-PS-LTX-315纳米药物对B16F10细胞具有选择性杀伤效果，A6具有优异的靶向性。值得注意的是，根据文献报道，LTX-315在血清中会很快降解，因此无法在有血清存在的条件下对细胞进行有效杀伤。而我们的载药囊泡却能够在10%血清存在下对细胞进行有效的抑制，说明我们设计的药物递送体系是有效的。图10A6-PS-LTX-315和PS-LTX-315对B16F10细胞的毒性4 .结论在本论文中，我们设计了mPEG-P(TMC-co-DTC)-KD10来制备不对称膜囊泡包载生物活性肽LTX-315,并对囊泡制备过程中的条件如载药量，溶液pH、靶向因子的修饰

34、进行了研究，能得到如下结论：在搅拌子OrPm的条件下制备的纳米粒子更大一些且在粒径分布上更为集中，在静置摇床中交联24h后的囊泡相比于200rpm摇床中交联更为稳定。在PH为5.3或6.4的缓冲溶液中制备的纳米粒子在透析后会发生团聚，说明这两种条件下制备的纳米粒子稳定性较差，所以我们选取PH为6.8的缓冲溶液作为后续实验中的水相条件。在载药量实验中，15%载药量的聚合物囊泡包封率与5%和10%载药量的囊泡均相差无几，都能达到90%以上。此外，在数次实验中15%的囊泡在透析后都会的稳定性会较10%的囊泡差一些。而20%罗丹明标记的LTX-315在载药实验中会由于药量过多会直接发生团聚，因此我们推

35、测15%接近于载药量理论上的最大值。值得高兴的是，囊泡在稳定性与响应性实验中表现良好，有利于纳米粒延长在体内循环时间并在细胞内GSH作用下快速释放。囊泡表面经A6修饰后会使得囊泡更大一些，粒径从33nm变成了44nm,更稳定地对生物活性肽进行包载。且在MTT实验中，相比于未修饰的囊泡，A6-PS-LTX-315对B16F10细胞具有选择杀伤性，靶向效果显著。虽然生物活性肽仍处于临床试验的阶段，还没能造福癌症患者。但它的低毒副作用，使生物活性肽成为饱受化疗折磨的癌症患者们所翘首以盼的福音。止匕外，简单的结构和合成，能大大减小多肽药物的造价，也方便了科研工作的深入与探索。虽然多肽药物还面临着种种阻

36、碍，但不断发展的纳米载药技术很可能解决这些难题。癌症逐年攀升的发病率与致死率，也促使着人们投入更大的精力到抗癌的工作中去。相信在将来，随着科技的不断进步，不仅仅是多肽药物能得到临床上的应用，各种新颖的药剂与疗法都会得到巨大的发展，为人类带来健康与幸福。参考文献lWangX,YangL.L.,ChenZ,ShinDM.Applicationofnanotechnologyincancertherapyandimaging.Ca-aCancerJournalforClinicians.2008;58:97-110.2BengtErikHaug,KetilAndreCamilio9LivToneEl

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